皮肤组织工程中骨髓间充质干细胞作为种子细胞的可行性研究

论文摘要

皮肤移植是治疗大面积烧伤或创伤后皮肤缺损的主要手段。其中自体皮移植是临床最为有效的方法，但受到自体皮源不足的限制。随着组织工程的兴起，人们意识到开发出能有效促进创面愈合与皮肤组织再生的新型皮肤再生产品具有重要意义。组织工程三大要素是种子细胞，支架材料及合适的微环境。种子细胞一直是组织工程研究的关键要素。理想的种子细胞应该具有以下的特点：来源方便；在体外增殖迅速可以短期扩增到所需的数量；长期体外传代不改变生物学特性等。骨髓间充质干细胞是成体干细胞的一种，具有自我更新能力和多向分化潜能。在特定的条件下可以成骨细胞，成软骨细胞及成脂肪细胞分化。骨髓间充质干细胞的获取不受伦理学的限制，且取材方便，免疫排斥反应小，增殖能力强，是一种理想的种子细胞。骨髓间充质干细胞能否向表皮细胞分化?能否作为构建组织皮肤工程的种子细胞?我们的试验基于这一思路展开。我们之前的研究结果表明骨髓间充质干细胞有很大可能分化为表皮细胞。于是我们从重复体外诱导分化，到动物创面愈合中再上皮化的表皮细胞中有无人源的骨髓间充质干细胞，再到体外用不对称支架构建看骨髓间充质干细胞能否形成表皮层或协同表皮细胞形成表皮。我们进行了大量的试验，但总的结果显示骨髓间充质干细胞尽管能促进创面的愈合，但分化为表皮细胞的确有难度。最后我们又从大面积烧伤病人着手，探讨在应激反应中，机体能否动员人的骨髓间充质干细胞到血液中而参与烧伤创面的修复，及今后血源性间充质干细胞有无可能作为表皮的种子细胞?结果显示可能性存在，但分离纯化的方法上还需努力。本实验的主要结果及推论如下：1．采用Percoll密度梯度离心结合贴壁筛选分离并培养扩增成人骨髓间充质干细胞，所得骨髓间充质干细胞呈典型的成纤维细胞形态，漩涡状生长；具有骨髓间充质干细胞的表面标志物。2．人骨髓间充质干细胞在特殊诱导液的作用下具有向表皮细胞分化的可能性。3．人骨髓间充质干细胞和体外定向诱导分化后的骨髓间充质干细胞对裸鼠的皮肤创面都有促进愈合作用，但在特殊诱导液作用下的骨髓间充质干细胞并没有表现出表皮细胞的功能；并没有出现在上皮化的裸鼠皮肤细胞中。4．我们采用纤维蛋白凝胶能够重复不对称支架的构建，并证实该支架对骨髓间充质干细胞没有毒性作用。但骨髓间充质干细胞作为种子细胞用于不对称支架进行构建组织工程化皮肤难度大5．利用Percoll分离液进行密度梯度离心法从大面积烧伤病人的外周血中没有分离培养出间充质干细胞，但是可能性存在。

论文目录

• 致谢
• 研究背景
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略语
• 目次
• 1 人骨髓间充质干细胞的分离、纯化培养扩增及定向诱导分化研究
• 1.1 前言
• 1.2 材料与方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 2 诱导及未诱导的人骨髓间充质干细胞用于裸鼠皮肤修复创面的研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 3 人工皮肤的构建
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 4 大面积烧伤病人血中MSC的分离培养
• 4.1 前言
• 4.2 材料和方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 5 参考文献
• 综述 组织工程皮肤种子细胞的研究进展
• 作者简历