论文摘要
细胞主要经Tf-TfR途径介导的入胞过程摄取其所必需的铁[1]。同时,生物体内存在多种非Tf-TfR途径的铁转运系统[2,3]。最近,文献报道[4-8] Lipocalin家族成员24p3/NGAL基因通过介导铁的转运,调节铁反应蛋白基因的表达,参与肾上皮细胞的分化过程和肾组织损伤的修复过程。24p3/SIP24蛋白是由小鼠24p3基因编码的分泌蛋白[9],NGAL （Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin）蛋白[10]发现于人的中性粒细胞,与小鼠24p3/SIP24蛋白有很高的同源性（60.2%）[7]。目前,关于24p3/NGAL介导转运功能的研究主要集中在肾上皮细胞及肾组织[4,5,6,8]。24p3/NGAL介导铁的跨膜转运过程是否为生物体内普遍存在的现象未见报道。肝脏是参与铁代谢调节的主要脏器,观察24p3/NGAL在肝细胞内铁稳态调节过程中的作用有重要的意义。为此,我们设计实验观察不同铁浓度水平下24p3/NGAL介导铁在H22细胞内聚集的生物学功能。现将主要的方法及结果归纳如下:第一部分pcDNA3.0/24p3重组质粒的构建与鉴定据小鼠24p3基因序列（NM:008491）设计引物并在上、下游引物分别引入BamH I和EcoR I酶切位点序列。RT-PCR方法自小鼠肺组织中克隆24p3基因全长cDNA并构建pcDNA3.0/24p3重组质粒。经DNA测序鉴定:pcDNA3.0/24p3重组质粒中插入的24p3基因片段与GenBank中登录的24p3基因全长cDNA序列（NM:008491）一致,且插入方向正确。第二部分pcDNA3.0/24p3重组质粒在小鼠NIH3T3细胞内表达脂质体转染方法转染pcDNA3.0/24p3重组质粒入NIH3T3细胞（重组质粒组）,G418筛选阳性克隆并培养、扩增。设空载体组（转染pcDNA3.0空载体的NIH3T3细胞）和未转染组（未转染质粒的正常NIH3T3细胞细胞）作对照。鉴定方法与结果:RT-PCR自重组质粒组NIH3T3细胞扩增到约600 bp的DNA条带,而空质粒组和正常NIH3T3细胞未扩增到目的DNA条带。ELISA法检测重组质粒组NIH3T3细胞培养液上清A492均值为0.287±0.059,空载体组和正常NIH3T3细胞培养液上清A492均值分别为0.057±0.073和0.042±0.085,重组质粒组与对照组间有二倍以上差异（P/N>2）。Western blot方法自重组质粒组NIH3T3细胞裂解液和细胞培养液上清混合物中检测到24 kD大小的特异性条带,而对照组均未见目的条带。结果表明24p3/SIP24蛋白在重组质粒组NIH3T3细胞
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