内皮素-1及其受体、受体拮抗剂在肺动脉高压综合征肉鸡中的作用研究

论文题目: 内皮素-1及其受体、受体拮抗剂在肺动脉高压综合征肉鸡中的作用研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 动物遗传育种与繁殖

作者: 周东海

导师: 郭定宗,熊远著,邓昌彦,陈焕春,郑用琏,喻传洲,龙良启

关键词: 内皮素,肺动脉高压综合征,肉鸡,内皮素受体,心钠素,一氧化氮,细胞内钙离子

文献来源: 华中农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 肉鸡肺动脉高压综合征(pulmonary hypertension syndrome,PHS)亦称肉鸡腹水综合征(ascites syndrome,AS),又称“心衰综合征”(heart failure syndrome,HFS)等,是快速生长肉鸡的一种常见非传染性疾病,以明显的腹水和心、肺功能衰竭为特征。全世界养鸡业每年因此病而损失巨大,随着养鸡业的发展,该病的发生有逐渐上升之势。肺动脉压升高是肉鸡肺动脉高压综合征的重要特点并对它的形成起决定性作用。内皮素(endothelin-1,ET-1)是一种由内皮细胞合成和分泌的、具有强烈收缩血管作用和促进细胞增生的血管活性多肽,心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)、NO等在心血管系统功能的调节中也起着重要作用。为研究肉鸡PHS的发病机理,本试验主要从ET-1角度出发,从以下几个方面对本试验进行了研究:用高能日粮饲喂较多肉鸡的方法获得PHS肉鸡模型;用放射免疫分析方法比较了不同腹水程度肉鸡在不同日龄时血浆和主要组织中ET-1的含量,同时还用硝酸还原酶法和放射免疫法对NO、NOS、ANP、AⅡ在肉鸡PHS发病过程中的作用加以研究;通过免疫组织化学染色方法和RT-PCR的方法研究了ETA受体及其基因在不同腹水程度和不同日龄肉鸡体内的分布情况及其表达水平;通过短期静脉注射ET-1、内皮素受体拮抗剂BQ123和长期给予ET-1的方法研究了ET-1、BQ123对肉鸡肺动脉压、PHS发病率、主要组织病理变化以及一些生理生化指标的影响;同时利用细胞培养的方法研究了ET-1、BQ123、L-Arg、L-NAME对培养的肉鸡心肌细胞的作用,从而比较全面地从ET-1的角度研究了肉鸡PHS的发病机理。主要试验结果如下: (1) 用高能日粮饲养肉鸡时从10日龄起有PHS发生,发病率为5.3%-6.7%,与自然情况下的发病率基本相同;右心导管法研究发现2-6周龄时肺动脉高压(PH)组肉鸡的平均肺动脉压(mPAP)极显著(p<0.01)高于正常组肉鸡;腹水心脏指数(ascites heart index,AHI)也极显著(p<0.01)或显著(p<0.05)高于正常组,且随日龄的增长有上升的趋势;PH组肉鸡血浆和主要组织(心、肝、肺、肾)中ET-1在2-5周龄时也显著(p<0.01)或极显著(p<0.05)高于正常组,而在6周龄时则呈现出复杂的变化;血浆ANP、NO、AⅡ在2-5周龄时显著或极显著高于正常组,随日龄的增长有升高的趋势,而在6周龄时则呈现出不规则的变化;几种组织相比,肺脏ET-1的含量最高;mPAP与血浆ET-1相关性显著,与血浆NO没有相关性,血浆ET-1与NO也没有明显的相关性。 (2) 用免疫组织化学染色的方法和RT-PCR的方法对不同腹水程度、不同日龄肉鸡ETAR及其基因在体内定位及其表达变化的情况进行了探讨。免疫组织化学染色

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第一部分 文献综述

1 肉鸡肺动脉高压综合征概述

1.1 发病特点

1.2 临床症状

1.3 病理学变化

1.4 血液生理生化

1.5 病因

1.6 发病机理

1.7 疾病诱发和复制

1.8 心电图分析

1.9 激素、受体方面

1.10 从自由基角度方面的研究

1.11 疾病防制

1.12 临床预测

2 内皮素及其受体、受体拮抗剂的研究进展

2.1 内皮素的化学结构及分类

2.2 内皮素-1的分布和代谢

2.3 内皮素的调控、生物合成与释放

2.4 内皮素-1的生理与病理作用

2.5 内皮素转化酶及其抑制剂

2.6 ET受体的分类、分布及其作用

2.7 影响和调节ET受体的因素

2.8 内皮素受体拮抗剂

2.9 内皮素受体拮抗剂的治疗作用

2.10 BQ123的主要生理作用

2.11 小结

3 ET-1与肉鸡PHS可能存在的关系

3.1 内皮素-1与肉鸡肺动脉高压形成之间可能存在的关系

3.2 内皮素-1与肉鸡右心肥大和右心衰竭可能存在的关系

3.3 小结

4 其它心血管活性物质在在心血管系统中的作用

4.1 NO、NOS在心血管系统中的作用

4.2 血管紧张素Ⅱ在心血管系统中的作用

4.3 ANP在心血管系统中的作用

第二部分 研究的目的和意义

第三部分 实验部分

第1章 PHS肉鸡模型的建立以及ET-1在肉鸡体内的分布研究

1.1 前言

1.2 材料与方法

1.2.1 实验动物的饲养与分组

1.2.2 主要仪器与试剂

1.2.3 测定指标及样品的处理

1.2.4 数据处理

1.3 结果

1.3.1 肉鸡饲养情况

1.3.2 右心导管法检测mPAP时的压力曲线图

1.3.3 平均肺动脉压mPAP的动态变化

1.3.4 腹水心脏指数AHI的动态变化

1.3.5 血浆内皮素-1含量的变化

1.3.6 血浆NO、NOS水平的变化

1.3.7 mPAP、血浆ET-1含量、血浆NO水平相互之间的相关性

1.3.8 随日龄的增长两组主要组织中ET-1含量的变化

1.3.9 血浆AⅠ、AⅡ、ANP的测定结果

1.4 讨论

1.4.1 关于肉鸡PHS模型的建立

1.4.2 腹水心脏指数AHI与PHS的关系

1.4.3 内皮素-1与肉鸡PHS的关系

1.4.4 内皮素-1、NO对肉鸡PHS的影响

1.4.5 ANP、AⅠ、AⅡ与肉鸡PHS可能存在的关系

第2章 内皮素A受体在PHS肉鸡体内的分布及变化研究

2.1 前言

2.2 材料和方法

2.2.1 实验材料

2.2.2 主要仪器与试剂

2.2.3 取材

2.2.4 细胞免疫化学染色的方法和步骤

2.2.5 鸡内皮素A型受体基因的cDNA克隆、测序

2.2.6 内皮素A型受体基因mRNA在鸡心脏组织中的表达分析

2.2.7 数据处理

2.3 结果

2.3.1 ETAR在肉鸡肺脏的定位

2.3.2 肺脏中ETAR表达量的变化

2.3.3 ETAR在肉鸡心脏中的定位

2.3.4 心脏中ETAR的表达量变化

2.3.5 ETAR在肉鸡肝脏中的定位

2.3.6 肝脏中的ETAR表达量变化

2.3.7 ETAR在肉鸡肾脏中的定位

2.3.8 肾脏脏中的ETAR表达量变化

2.3.9 内皮素受体A基因cDNA序列的克隆、测序结果

2.3.10 内皮素A型受体基因mRNA在鸡心脏组织中的表达分析

2.4 讨论

2.4.1 关于免疫细胞化学技术

2.4.2 ETAR在肺脏中的变化规律及其意义

2.4.3 ETAR在心脏中的变化规律及其意义

2.4.4 ETAR在肝脏和肾脏中的变化规律及其意义

第3章 ET-1、ANP、NO、NOS在肉鸡PHS发生发展过程中的作用

3.1 前言

3.2 材料与方法

3.2.1 供试动物及其分组

3.2.2 主要仪器与试剂

3.2.3 测定指标以及样品的处理

3.3 结果与分析

3.3.1 5周龄分组后不同组肉鸡体重、腹水量和AHI的变化情况

3.3.2 5周龄不同腹水程度的肉鸡mRVP、mPAP检测的结果

3.3.3 2-6周龄不同腹水程度肉鸡的平均肺动脉压mPAP的变化

3.3.4 2-6周龄不同腹水程度肉鸡AHI的变化

3.3.5 3-6周龄不同腹水程度肉鸡TV／BW(％)的变化

3.3.6 2-6周龄不同腹水程度肉鸡的血浆中ANP的含量变化

3.3.7 NO的动态变化

3.3.8 3-6周龄不同腹水程度肉鸡血清iNOS、cNOS活性的变化

3.3.9 5周龄不同腹水程度肉鸡组织中ET-1含量的变化

3.3.10 5周龄不同腹水程度肉鸡组织中ANP的含量变化

3.3.11 2-6不同腹水程度肉鸡肺组织中iNOS、cNOS活性的动态变化

3.3.12 2-6周龄不同腹水程度肉鸡血浆ANP与AHI、mPAP的相关性分析

3.3.13 5周龄不同腹水程度肉鸡各指标之间的相关性分析

3.4 讨论

3.4.1 AHI、mPAP与肉鸡PHS发生发展的关系

3.4.2 ET-1与PHS肉鸡右心肥大和右心衰竭之间的关系

3.4.3 ET-1以及NO与肉鸡PH的形成和发展的关系

3.4.4 PHS肉鸡cNOS和iNOS的变化及其意义

3.4.5 ANP与肉鸡右心肥大和右心衰竭之间的关系

3.4.6 ANP与肉鸡PH的形成和发展的关系

3.5 小结

第4章 外源性内皮素-1及其受体拮抗剂BQ123对肉鸡PHS的影响

4.1 前言

4.2 材料和方法

4.2.1 主要仪器

4.2.2 主要试剂以及部分溶液的配制

4.2.3 实验动物的饲养及其分组

4.2.4 测定指标

4.3 结果

4.3.1 静脉注射不同剂量ET-1后在0-30min内监测到的mPAP

4.3.2 静脉注射240ng／kg ET-1后在0.5、1、2h时的mPAP的变化

4.3.3 静脉注射不同剂量的ET-1后在0.5、1、2h后血浆中各指标的变化

4.3.4 静脉注射不同剂量的BQ123后30min内不同时间mPAP的变化

4.3.5 静脉注射3μg/kg的BQ123后在0.5、1、2h时的mpAp的变化

4.3.6 静脉注射不同剂量BQ123后在0.5、1、2h时血浆中各指标的变化

4.3.7 静脉注射不同剂量的BQ123后再注射ET-1时mPAP的变化情况

4.3.8 A-C组肉鸡的腹水发生率

4.3.9 红细胞压积PCV在不同时期的变化

4.3.10 各组肉鸡AHI在不同时期的变化

4.3.11 各组肉鸡血浆NO在不同时期的变化

4.3.12 各组肉鸡在不同时期时的mPAP的变化

4.3.13 长期静脉注射ET-1后42日龄肉鸡主要组织的病理变化

4.4 讨论

4.4.1 外源性ET-1对肉鸡肺动脉压的直接影响

4.4.2 BQ123对肉鸡肺动脉压的作用以及拮抗ET-1引起的PH的作用

4.4.3 给予外源性ET-1后对肉鸡PHS发生率的影响

4.4.4 ET-1长期给予后对血管的影响

第5章 ET-1及其受体拮抗剂BQ123对培养的肉鸡心肌细胞的影响

5.1 前言

5.2 材料与方法

5.3 结果

5.3.1 原代培养的细胞

5.3.2 传代培养的心肌细胞

5.3.3 HE染色标本

5.3.4 心肌细胞PAS反应鉴定的结果

5.3.5 免疫组化染色结果

5.3.6 培养的心肌细胞的细胞生长曲线

5.3.7 MTT比色法测细胞活力的结果

5.3.8 不同浓度ET-1及其受体拮抗剂BQ123对心肌细胞内[Ca~(2+)]i的作用

5.3.9 ET-1及BQ123对细胞DNA、细胞蛋白质、细胞胶原合成的影响

5.3.9.1 不同浓度的ET-1对心肌细胞增殖的影响

5.3.9.2 不同浓度的BQ123对心肌细胞增殖的影响

5.3.9.3 不同浓度的BQ123对ET-1的促心肌细胞增殖作用的抑制作用

5.4 讨论

5.4.1 试验前的准备工作

5.4.2 取材及培养材料制备的注意事项

5.4.3 关于试验方法的讨论

5.4.4 内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂BQ123对肉鸡心肌细胞的作用

5.4.4.1 心功能损伤与PHS的关系

5.4.4.2 ET-1促进肉鸡心肌细胞的生长和肥大作用

5.4.4.3 ET-1对促进肉鸡心力衰竭的作用

5.4.4.4 ET-1与肉鸡心肌细胞的[Ca~(2+)]i的变化

5.4.4.5 ET-1促进肉鸡心肌细胞[Ca~(2+)]i增加的可能机理

第四部分 实验总结及下步计划

参考文献

致谢

在读期间发表论文题录

发布时间: 2005-12-05

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