论文摘要
气道重塑（Remodeling）又称气道重建或气道重构,是慢性哮喘反复发作的重要病理生理基础,它与哮喘肺功能损害及气道高反应性密切相关。细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的降解和沉积失衡是导致气道壁结构异常、肺实质破坏及间质增生的重要原因, ECM主要由基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMPs）来降解,其中基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase 9,MMP-9）是锌依赖性蛋白酶,基质金属蛋白酶-9催化集团区含有3个重复的类Ⅱ型纤维连接蛋白结合区,决定了它对明胶和弹力纤维的底物特异性,主要降解Ⅳ型以及Ⅴ型胶原。近来研究表明MMP-9在支气管哮喘患者的气道炎症和组织重塑中发挥重要作用。核因子-κB （nuclear factor kappa B, NF-κB）是一种多功能核转录因子,具有广泛的生物学活性,不仅参与哮喘的炎症反应,还参与哮喘气道的重塑过程。研究表明血小板活化因子（Platelet-activating Factor,PAF）是NF-κB特异激活因子,PAF通过早期激活NF-κB来导致各种炎症反应。银杏叶提取物是PAF的特异性抑制因子。研究证明MMP-9是NF-κB的靶因子,NF-κB增加可直接导致MMP-9表达的升高,但是,目前尚未有研究证明PAF是否通过影响NF-κB来影响MMP-9表达。因此,本研究分为两部分,探索银杏叶提取物对慢性哮喘小鼠表达MMP-9的影响及银杏叶提取物是否是通过抑制NF-κB的表达而影响MMP-9的表达。第一部分:目的:探索银杏叶提取物对慢性哮喘小鼠表达MMP-9的影响。方法:建立哮喘小鼠气道重塑模型,40只BALB/c小鼠按随机数字法分为4组:对照组,哮喘组,银杏叶干预组,地塞米松干预组。以鸡卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏并激发制备小鼠慢性哮喘模型。对肺组织切片行苏木精-伊红染色观察气道重塑情况。免疫组化测各组小鼠肺组织MMP-9的表达。RT-PCR检测各组小鼠肺组织MMP-9 mRNA表达。结果:哮喘组动物出现管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变,免疫组化染色显示气道各层细胞及炎性细胞均有MMP-9表达的增多,且MMP-9 mRNA水平也显著增高。地塞米松干预组和银杏叶干预组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显,免疫组化染色示各细胞MMP-9表达也有所降低, MMP-9 mRNA水平表达降低,与对照组比较差异有统计学意义。结论:长期吸入变应原可导致气道重塑,MMP-9在气道重塑中发挥了作用,银杏叶的干预作用说明在PAF和MMP-9之间可能存在某种联系。第二部分:目的:探索银杏叶提取物对慢性哮喘小鼠表达NF-κB的影响及其与MMP-9表达的关系方法:建立哮喘小鼠气道重塑模型,40只BALB/c小鼠按随机数字法分为4组:对照组,哮喘组,银杏叶干预组,地塞米松干预组。以OVA致敏并激发制备小鼠慢性哮喘模型。对肺组织切片行苏木精-伊红染色观察气道重塑情况。免疫组化测各组小鼠肺组织NF-κB的表达。RT-PCR检测各组小鼠肺组织NF-κB mRNA表达。作NF-κB活化与MMP-9表达的相关关系分析。结果:哮喘组动物出现管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变,免疫组化染色显示NF-κB明显活化,且NF-κB mRNA水平也显著增高。地塞米松干预组和银杏叶干预组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显,免疫组化染色示NF-κB活化也有所降低, NF-κB mRNA水平表达降低,与对照组比较差异有统计学意义。且NF-κB活化与MMP-9表达呈正相关。结论:银杏叶提取物可能会引起慢性哮喘小鼠NF-κB活化减少,而NF-κB活化的减少可能会进一步导致MMP-9表达的降低。