补肾活血法及其组方对PCO大鼠卵巢局部相关基因表达影响的研究

论文摘要

目的：在预实验基础上建立了较为合理的多囊卵巢实验动物模型；采用中药汤剂补肾化瘀方干预实验动物模型的方法,研究补肾化瘀方对实验大鼠卵巢局部颗粒细胞和卵泡膜细胞相关基因表达的影响；探讨肾虚血瘀与多囊卵巢综合征之间理论上的内在关系；为实验及临床研究PCOS提供思路。方法：选用6周龄SPF级SD雌性大鼠79只,有规律动情周期,将其饲养于SPF级动物所要求的环境中,按1：5的比例,将实验动物随机分为造模组和正常组后,用来曲唑灌胃诱导大鼠PCO病理模型,正常组同期用1%羧甲基纤维素水溶液灌胃21天。造模成功后,造模组随机分为模型空白对照组、补肾化瘀方高剂量组、补肾化瘀方中剂量组、补肾化瘀方低剂量组及阳性药物对照组,加上正常组,共六组,分别用生理盐水、补肾化瘀方不同浓度的汤剂和达英-35进行药物干预,（Qd×3d,休息1d）×21次。干预周期结束后每组随机抽取八只大鼠的一侧卵巢分离颗粒细胞,实时荧光定量PCR测定基因表达数值以观察补肾化瘀方对PCO大鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞上CYP17、AR、IGFR、ER、INSR、LHR、FSHR、TGFR、MMP2、MMP9、follistain、tPA、EGFR等13个相关基因表达的影响。结果：①正常组与模型空白对照组比较,被检测13个基因中有AR、ER、LHR、FSHR、MMP9、EGFR、IGFR、INSR、tPA、TGFR共10个基因,差异有统计学意义（P<0.05）。②在卵巢颗粒细胞CYP17表达上,补肾化瘀方低剂量组与补肾化瘀方中剂量组差异有显著统计学意义（P<0.01）。③13个被检测基因中,卵巢颗粒细胞上有CYP17、AR、IGFR、ER、INSR、LHR、FSHR、TGFR、MMP9、tPA、EGFR共11个基因各组间表达差异有统计学意义（P<0.05）。而仅基因AR、EGFR共2个基因在卵巢卵泡膜细胞上各组间表达差异有统计学意义（P<0.05）。④补肾化瘀方低剂量组、阳性药物对照组、正常组与模型空白对照组比较,在卵巢颗粒细胞AR表达上差异有统计学意义（P<0.05）；补肾化瘀方中剂量组、补肾化瘀方低剂量组与模型空白对照组比较,在卵巢颗粒细胞IGFR表达上差异有统计学意义（P<0.05）；补肾化瘀方低剂量组、正常组与模型空白对照组比较,在卵巢颗粒细胞FSHR表达上差异有统计学意义（P<0.05）。结论：补肾化瘀方对PCO大鼠颗粒细胞和卵泡膜细胞上相关基因的表达有影响,提示补肾化瘀方治疗PCOS可能与改善卵巢局部颗粒细胞上和卵泡膜细胞基因受体表达有关。

论文目录

• 缩略词简表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 实验研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验条件
• 1.3 药品及试剂
• 1.4 实验设备
• 1.5 实验耗材
• 2 造模方法
• 2.1 分组
• 2.2 具体方法
• 2.3 造模评价
• 3 补肾化疲方干预实验
• 3.1 动物分组
• 3.2 药物干预
• 3.3 标本的采集
• 4 颗粒细胞和卵泡膜细胞相关基因检测方法
• 4.1 取样:
• 4.2 样品的RNA抽提
• 4.3 NRA质量检测
• 4.4 使用样品的RNA进行cDAN合成
• 4.5 实时定量PRc检测
• 4.6 实时定量PCR使用引物歹.1表
• 5 统计学方法
• 第二部份 结果与分析
• 1.各组PCO大鼠卵巢颗粒细胞上相关基因表达
• 1.1 与甾体激素合成与作用有关的基因
• 1.2 与碳水化合物合成相关的基因
• 1.3 与促性腺激素功能相关的基因
• 1.4 其他相关基因
• 2.各组PCO大鼠卵巢卵泡膜细胞上相关基因表达
• 2.1 与甾体激素合成与作用有关的基因
• 2.2 与碳水化合物合成相关的基因
• 2.3 与促性腺激素功能相关的基因
• 2.4 其他相关基因
• 3.小结
• 3.1 关于模型的评价
• 3.2 补肾化瘀方剂量对相关基因表达的影响
• 3.3 关于补肾化瘀方作用于卵巢局部的基因靶点探索
• 4. 检测基因的标准曲线图
• 5. RNA电泳图
• 第三部份 讨论
• 1.关于多囊卵巢综合征的理论认识
• 2.关于PCO大鼠动物模型的建立
• 3.中医药干预PCO动物相关实验研究
• 4.卵泡膜细胞功能调节与PCOS
• 5.颗粒细胞功能调节与PCOS
• 6.与PCOS相关的遗传基因研究
• 7.肾虚血瘀与PCOS
• 8.补肾活血法及其组方治疗PCOS的机理探讨
• 9.本研究的不足之处与研究展望
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录