酰基硫脲类和氨基甲酸酯类的合成及其环氧化物水解酶抑制活性研究

论文摘要

本文首次合成了新型荧光探针3-环氧丁基-6-甲基荧光素,并用于检测酰基硫脲类和氨基甲酸酯类化合物对环氧化物水解酶的抑制活性；同时检测了部分化合物对大肠杆菌的抑菌活性,主要内容如下：首先,根据环氧化物水解酶的酶学特性,设计、并制备了一种以荧光素为母体的荧光探针,经过验证,表明该探针具有较高的灵敏度和专一性,可用于环氧化物水解酶抑制剂的快速筛选。其次,以酰氯和硫氰酸钠为原料,经异硫氰酸酯化后得到酰基异硫氰酸酯；再与胺类发生亲核加成,合成了酰基硫脲类化合物,收率达到85%以上。再次,以苯甲酰氯和三光气为原料,经异氰酸酯化后得到苯基异氰酸酯,再与醇或者酚发生亲核加成,合成了氨基甲酸酯类化合物,收率达到80%以上。最后,利用新型荧光探针检测目标化合物对环氧化物水解酶的抑制活性,实验结果表明具有一定的抑制效果,其中化合物3-17,3-33的IC50为1.12μM,1.01μM；在此基础上,对部分化合物作了抑菌实验,通过抑菌圈的大小来判断抑制效果,其中化合物3-1,3-25的抑菌直径可达21mm、23mm,表明抑制效果较好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第一章 综述
• 1.1 环氧化物水解酶的简介
• 1.1.1 环氧化物水解酶的组织分布
• 1.1.2 环氧化物水解酶的结构和功能
• 1.2 环氧化物水解酶与疾病的关系
• 1.2.1 环氧化物水解酶与高血压的关系
• 1.2.2 环氧化物水解酶与心肌肥厚之间的关系
• 1.2.3 环氧化物水解酶与急性炎症的关系
• 1.3 环氧化物水解酶抑制剂的研究现状
• 1.3.1 脲类抑制剂
• 1.3.1.1 环烷烃－脲类抑制剂
• 1.3.1.2 金刚烷—脲类抑制剂
• 1.3.1.3 芳基-脲类抑制剂
• 1.3.2 酰胺类抑制剂
• 1.3.2.1 金刚烷-酰胺类抑制剂
• 1.3.2.2 哌啶-酰胺类抑制剂
• 1.4 荧光探针检测酶活
• 1.5 本课题的研究意义、主要内容和目标
• 1.5.1 研究意义
• 1.5.2 研究内容
• 1.5.3 研究目标
• 参考文献
• 第二章 环氧化物水解酶荧光探针的合成及其检测
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要试剂和药品
• 2.1.2 实验器皿和设备
• 2.1.3 主要试剂配制
• 2.1.3.1 展开剂的配制
• 2.1.3.2 缓冲液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 环氧化物水解酶的提取
• 2.2.2 探针的合成
• 2.2.2.1 荧光素甲酯的合成（2-1）
• 2.2.2.2 3-丁烯基-6-甲基荧光素的合成（2-2）
• 2.2.2.3 3-环氧丁基-6-甲基荧光素的合成（2-3）
• 2.2.3 荧光素、荧光素甲酯和探针的荧光强度比较
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 环氧化物水解酶提取结果
• 2.3.2 探针与环氧化物水解酶的作用机理
• 2.3.3 探针专一性的测定
• 2.3.4 反应时间对检测的影响
• 2.3.5 反应浓度对检测的影响
• 2.4 本章小结
• 参考文献
• 第三章 酰基硫脲类环氧化物水解酶抑制剂的制备
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 乙酰基异硫氰酸酯的合成（3-1）
• 3.2.2 苯酰基异硫氰酸酯的合成（见3.2.1,3-2）
• 3.2.3 N-苯基-N’-乙酰基硫脲的合成（3-3）
• 3.3 实验结果与讨论
• 3.3.1 实验结果
• 3.3.2 讨论
• 参考文献
• 第四章 氨基甲酸酯类环氧化物水解酶抑制剂的制备
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 苯基异氰酸酯的合成（4-1）
• 4.2.2 苯基异氰酸甲酯的合成（4-2）
• 4.2.3 苯基异氰酸邻甲基苯酯的合成（4-4）
• 4.3 实验结果与讨论
• 4.3.1 实验结果
• 4.3.2 讨论
• 参考文献
• 第五章 目标化合物的生物活性检测
• 5.1 实验材料
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 酰基硫脲类化合物活性的检测
• 5.2.1.1 检测方法
• 5.2.1.2 抑制效果的评价方法
• 5.2.2 氨基甲酸酯类化合物的活性检测
• 5.2.2.1 检测方法（见5.2.1.1）
• 5.2.2.2 抑制效果的评价方法（见5.2.1.2）
• 5.2.3 化合物抑菌实验
• 5.3 实验结果与讨论
• 5.3.1 实验结果
• 5.3.1.1 酰基硫脲类化合物的检测结果
• 5.3.1.2 氨基甲酸酯类化合物的活性检测
• 5.3.1.3 化合物抑菌圈的测定
• 5.3.1.4 分子摸拟
• 5.3.2 讨论
• 5.4 本章小结
• 参考文献
• 第六章 总结与展望
• 附录Ⅰ：主要化合物谱图
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文