抑制Toll样受体4/核因子-κB途径对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响

抑制Toll样受体4/核因子-κB途径对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响

论文摘要

研究背景:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)是一种在发病起始和整个过程中都伴有免疫反应的慢性炎症性疾病。在动脉粥样硬化的发生与发展中,Toll样受体(TLRs)作为介导先天免疫与炎症反应的主要模式识别受体,识别内、外源性的配体后通过激活核因子-κB途径诱导细胞间黏附分子以及单核细胞趋化因子等炎症因子的表达而发挥作用。1997年,人类的第一个类似于果蝇的Toll受体-TLR4被发现,随后在哺乳动物体内发现了13种TLRs。最先证实TLRs与动脉粥样硬化相关的动物是C3H/HeJ小鼠,该鼠编码TLR4的基因外显子发生突变,以致不能表达TLR4,高胆固醇喂养8-14周,该鼠的As发生远较对照组轻。在人和鼠的As斑块当中内皮细胞与巨噬细胞TLR4的高表达;oxLDL刺激后的内皮细胞和巨噬细胞,其表达显著上调。内源性的配体如oxLDL、HSP60等激活TLR4后,使血管内皮细胞激活,表达多种黏附分子和趋化因子,单核细胞趋化到内膜下;巨噬细胞上的TLR4被oxLDL激活后,上调SR-A的表达,致使巨噬细胞吞噬大量的oxLDL后变成泡沫细胞,促进As的发生。TLR4的激活能促进血管内膜的增生,参与动脉外膜的重构等。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶中的一种黄酮类物质,现已证实其对心血管具有保护作用。离体和在体试验均证实,EGCG能抑制TLR4激活后信号转导通路中的MyD88依赖和非依赖的两条途径中的关键激酶,进而抑制TLR4/NF-κB的激活,降低炎症因子、黏附分子以及趋化因子的表达。本研究拟通过TLR4/NF-κB抑制剂EGCG对TLR4/NF-κB途径的抑制来研究apoE-/-小鼠TLR4、NF-κB及多种炎症因子的表达和动脉粥样硬化病变程度的改变,从而探讨TLR4/NF-κB途径在动脉粥样硬化病变发生中的作用。目的:观察TLR4/NF-κB抑制剂EGCG对apoE-/-小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块和TLR4、NF-κB、炎症因子表达的影响,以探讨TLR4/NF-κB途径在动脉粥样硬化病变发生中的作用。方法:5周龄雄性apoE-/-小鼠50只,随机分成四组(对照组2组,实验组2组):基础饮食组对照组(n=12)、高脂饮食组对照组(n=12)、基础饮食+EGCG实验组(n=13)、高脂饮食+EGCG实验组(n=13)。基础饮食平衡2周后开始给药,实验组用0.1%EGCG的PBS溶液按10mg/kg(相当于10ml/kg)腹腔注射给药,隔日一次,对照组则按10ml/kg注射PBS溶液。给药14周后处死动物,从主动脉根部连续冰冻切片,油红O染色观察主动脉窦处动脉粥样硬化斑块面积,定量分析主动脉窦粥样硬化斑块大小及占管腔的面积百分比;苏丹Ⅳ染色观察整个主动脉动脉粥样硬化病变;采用逆转录聚合酶链式反应法检测主动脉TLR4mRNA的表达,蛋白印迹技术检测TLR4蛋白表达,免疫组化法检测TLR4和NF-κB在主动脉的表达;酶联免疫吸附方法检测小鼠血清中单核细胞趋化蛋白-1,肿瘤坏死因子-α,细胞间粘附分子-1的浓度。结果:EGCG能显著降低血浆TC、TG、LDL-C的水平,升高HDL/TC比值;EGCG能显著减轻apoE-/-小鼠主动脉和主动脉窦部的动脉粥样硬化病变;实验组(基础饮食+EGCG和高脂饮食+EGCG)小鼠主动脉粥样斑块面积(0.46±0.08mm2和1.05±0.13 mm2)比相应对照组(基础饮食和高脂饮食组)(0.84±0.12mm2和2.37±0.38mm2)明显减少(P<0.01),斑块占管腔面积也显著缩小(P<0.01);高脂饮食+EGCG组小鼠TLR4 mRNA、蛋白表达显著降低(P<0.01),TLR4和NF-κB在主动脉的表达明显减弱;血清单核细胞趋化蛋白-1,细胞间粘附分子-1和肿瘤坏死因子-α的含量减少,与高脂饮食对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:1.TLR4/NF-κB途径抑制剂EGCG能显著减轻apoE-/-小鼠主动脉和主动脉窦部的动脉粥样硬化病变。2.EGCG具有调脂作用,能显著降低apoE-/-小鼠血浆TC、TG、LDL-C的水平,升高HDL/TC比值。3.EGCG能显著抑制高脂饮食apoE-/-小鼠单核细胞趋化蛋白-1、肿瘤坏死因子-α和细胞间粘附分子-1的生成。4.EGCG减轻高脂饮食apoE-/-小鼠主动脉动脉粥样硬化病变除降脂的作用外,还可能与其下调主动脉TLR4、NF-κB表达,抑制TLR4/NF-κB途径有关。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 论文正文
  • 前言
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 实验结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 主要英文缩略语索引
  • 综述
  • 成果目录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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