蓝玉簪颗粒对肝纤维化的治疗作用研究

论文摘要

目的纤维化（fibrosis）可发生于多种器官,引起器官内纤维结缔组织增生,实质细胞减少,持续进展可导致器官结构破坏和功能减退,直至器官衰竭,严重影响人类健康。器官纤维化（organ fibrosis）一直是世界医学的研究热点问题之一。糖皮质激素是目前治疗肝纤维化的常规用药物,但它可以引起严重的免疫系统紊乱和骨代谢疾病。目前开展的中药治疗纤维化的研究已初步显示了中药在防治各种器官（肺脏、肝脏、心脏等）纤维化方面的良好前景。蓝玉簪龙胆是一种藏族常用的治疗肺部感染的草药。我们的研究证实其在博莱霉素诱导的动物肺纤维化治疗中,具有对抗和治疗肺纤维化的作用,并且不具有糖皮质激素副作用（国家发明专利申请号:200510042636.3）。本实验的目的是用蓝玉簪颗粒对二甲基亚硝胺（DMN）诱导的实验性肝纤维化进行干预,并观察其对肝纤维化的治疗作用,初步探讨其作用机理,试图为临床肝纤维化的寻找新的药物。方法（1）30只大鼠随机分为5组,每组6只:正常对照组、二甲基亚硝胺模型组（DMN组）;蓝玉簪龙胆治疗组（LYZ组）;强的松治疗组（强的松组）;蓝玉簪龙胆+强的松治疗组（LYZ+强组）。参照JENKINS等介绍的制备DMN诱导大鼠肝纤维化模型的方法。同时正常对照组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射生理盐水,DMN组、LYZ组、强的松组、LYZ+强组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射（5 mg/L）DMN溶液,每周连续注射3 d,共4 wk。其中正常对照组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射生理盐水,其余各组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射（5 mg/L）DMN溶液,每周连续注射3 d,共4 wk,造模同时按分组给与药物干预。于建模后28d腹主动脉放血处死各组动物,迅速摘取肝脏,右叶肝制成组织匀浆进行生化检测,左叶肝投入10%甲醛中固定,常规包埋,切片,进行HE、MASSON染色,光学显微镜下观察观察纤维化的程度。肝组织匀浆后进行超氧化物歧化酶（SOD）、单胺氧化酶（MAO）活力、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量检测。血清用于谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及透明质酸（HA）的测定。（2）42只大鼠随机分为6组:正常对照组6只;二甲基亚硝胺模型组6只（DMN组）;强的松治疗组6只（强的松组）;蓝玉簪颗粒高剂量组8只（KL高剂量组）;蓝玉簪颗粒中剂量组8只（KL中剂量组）;蓝玉簪颗粒低剂量组8只（KL低剂量组）。建立DMN诱导的肝纤维化动物模型,建模当日对各组动物进行治疗:正常对照组:每日按体重0.5ml/100g生理盐水灌胃;二甲基亚硝胺对照组（DMN组）:每日按体重0.5ml/100g生理盐水灌胃;强的松治疗组:将强的松片研成粉末,加蒸馏水配制成0.06%的溶液,参照文献按6mg/kg进行灌胃;蓝玉簪颗粒高剂量组（KL高剂量组）:蓝玉簪颗粒由第四军医大学第三附属医院药剂科制作,主要成分为蓝玉簪龙胆,辅以三七总苷。每日按4 g生药?kg体重灌胃;蓝玉簪颗粒中剂量组（KL中剂量组）:每日按2 g生药?kg体重灌胃;蓝玉簪颗粒低剂量组（KL低剂量组）:每日按1 g生药?kg体重灌胃。于建模后28d腹主动脉放血处死各组动物,迅速摘取肝脏,右叶肝制成组织匀浆进行生化检测,左叶肝投入10%甲醛中固定,常规包埋,切片,进行HE、MASSON染色,光学显微镜下观察观察纤维化的程度。肝组织匀浆后进行超氧化物歧化酶（SOD）、单胺氧化酶（MAO）活力、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量检测。血清用于谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及透明质酸（HA）的测定。结果:（1）与正常对照组比较,模型对照组血清ALT与HA均明显增高, （P<0.05）。蓝玉簪治疗组（LYZ）较模型对照组ALT与HA明显下降（P<0.05）,强的松治疗组与蓝玉簪和强的松联合用药治疗组与模型对照组相比ALT和HA显著降低（P<0.05）。DMN组SOD、GSH活力均显著地低于正常对照组（P<0.05）,MAO活力显著的高于正常对照组,MDA也高于正常对照组,但没有显著差别;强的松组SOD、GSH活力显著低于正常对照组和LYZ组,与DMN组没有显著性差异, MAO、MDA活力显著地低于DMN对照组（P<0.05）,其中MDA活力也显著低于正常对照组。（2）与正常对照组比较,模型对照组血清ALT与HA均明显增高, （P<0.05）。蓝玉簪颗粒各治疗组较模型对照组ALT与HA明显下降（P<0.05）,强的松治疗组与模型对照组相比ALT和HA显著降低（P<0.05）。DMN组SOD、GSH活力均显著地低于正常对照组（P<0.05）,MAO、MDA活力显著的高于正常对照组,但没有显著差别;蓝玉簪颗粒高剂量组SOD、GSH活力显著地高于DMN组（P<0.05）,较正常对照组没有显著差别;MAO、MDA活力显著地低于DMN对照组（P<0.05）,与正常对照组没有显著性差异;强的松组SOD、GSH活力显著低于正常对照组和蓝玉簪颗粒组,与DMN组没有显著性差异, MAO、MDA活力显著地低于DMN对照组（P<0.05）,其中MDA活力也显著低于正常对照组;蓝玉簪颗粒治疗组较激素组效果明显,且有一定的剂量依赖性;HE和MASSON染色观察到肝纤维化程度改善。结论本课题的实验结果表明,蓝玉簪颗粒和强的松均对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化有一定的预防、治疗作用。其中蓝玉簪颗粒可减轻肝组织中脂质过氧化反应,清除氧自由基并抑制其生成,并削弱炎症反应,减少炎症细胞的渗出,在肝纤维化形成的早期发挥作用,提示其治疗作用机理是通过改善氧化与抗氧化平衡,抑制炎症反应,以达到减轻或抑制肝纤维化的形成。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 实验研究
• 1.蓝玉簪龙胆对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化治疗作用的研究
• 1.1 试验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 1.4 讨论
• 2. 蓝玉簪颗粒对大鼠肝纤维化药理作用的研究
• 2.1 材料和方法
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢