论文摘要
目的研究尼莫地平（NMDP）与阿糖胞苷（A-rac）联合对HL-60细胞线粒体膜电位变化的影响，同时观察NMDP与A-rac联合对HL-60细胞内活性氧生成的影响。以探讨HL-60细胞凋亡与线粒体膜电位（△Ψm）变化及细胞内活性氧生成的关系，为进一步探讨NMDP与A-rac联合诱导HL-60细胞凋亡的机制提供理论依据。方法采用罗丹名123染色及流式细胞仪检测HL-60细胞线粒体膜电位变化；流式细胞仪、AO／EB染色检测HL-60细胞凋亡。利用荧光显微镜、DCFH-DA（2，7-dichlorofluorescein diacetate）活性氧检测试剂盒检测HL-60细胞活性氧的变化。结果①Ara-c作用于HL-60细胞6h时出现细胞线粒体膜电位下降，当Ara-c浓度为0.05mg／ml时6h、12h、24h HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为117.9±7.6、100.9±7.7、87.6±10.7，不同培养时间荧光强度差异有显著性（P＜0.05）；当Ara-c浓度为0.1mg／ml时6h、12h、24h HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为111.9±10.1、86.6±9.2、68.4±12.2，不同时间差异有显著性（P＜0.05）；不同浓度组在12h、24h时比较有显著性差异（P＜0.05）。当Ara-c浓度为0.05mg／ml时6h、12h、24h HL-60细胞凋亡率分别为（41.2±3.0）％、（53.7±5.1）％、（65.8±2.6）％，不同培养时间差异有显著性（P＜0.01）；当Ara-c浓度为0.1mg／ml时6h、12h、24h HL-60细胞凋亡率分别为（45.7±4.1）％、（58.2±4.3）％、（70.1±2.3）％，不同培养时间差异有显著性（P＜0.01）；不同浓度Ara-c在相同时间凋亡率无差别。HL-60细胞线粒体膜电位变化与其凋亡率呈高度负相关，当Ara-c浓度为0.05mg／ml时，r=-0.89，P＜0.01；当Ara-c浓度为0.1mg／ml时，r=-0.76，P＜0.01。②Ara-c+NMDP组（Ara-c浓度为0.05mg／ml，NMDP浓度为0.01mg／ml）6h、12h、24h HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为99.8±9.8、85.3±8.0、67.2±7.6，不同时间荧光强度差异有显著性（P＜0.05）；与Ara-c浓度为0.05mg／ml组在相同时间比较有显著性差异（P＜0.05）。Ara-c+NMDP组6h、12h、24h HL-60细胞凋亡率分别为（51.4±3.2）％、（63.9±2.4）％、（83.1±4.8）％，不同时间差异有显著性（P＜0.01）；与Ara-c浓度为0.05mg／ml组在相同时间比较有显著性差异（P＜0.05）。HL-60细胞线粒体膜电位变化与其凋亡率呈高度负相关，Ara-c+NMDP组r=-0.73，P＜0.01。③单纯A-rac组及对照组6、12、24小时荧光强度微弱，活性氧为阴性。Ara-c+NMDP组6、12、24小时活性氧均呈阳性表达。单纯NMDP组6、12、24小时活性氧均呈弱阳性表达。结论1、A-rac在诱导HL-60细胞凋亡时伴有线粒体膜电位下降，呈时间、浓度依赖性，且NMDP可以加强A-rac诱导HL-60细胞线粒体膜电位下降的作用。细胞线粒体膜电位变化与凋亡呈显著负相关，线粒体膜电位下降可能是A-rac诱导HL-60细胞凋亡的重要机制之一。2、A-rac能诱导HL-60细胞凋亡，但不诱导细胞内活性氧生成。NMDP能诱导活性氧生成，这可能是其增强阿糖胞苷诱导细胞凋亡作用的机制之一。