论文摘要
背景和目的: 瘢痕愈合是创伤修复的主要方式,其结果是:一方面,瘢痕的形成可以覆盖创面,增加创面强度;另一方面,瘢痕的增生影响表形美观,甚至影响机体局部功能和患者的心理健康。研究发现许多种系动物在胚胎期能以无瘢痕愈合模式实现创口的愈合。其机制可能与基因的表达改变有关,也可能与某些蛋白的表达差异有关。本实验拟建立胎兔皮肤切割伤模型,运用双向电泳技术分离兔皮肤组织总蛋白,经比较和分析寻找与胎兔皮肤无瘢痕愈合相关的蛋白,了解其与无瘢痕愈合的关系,为实现对创伤后瘢痕增生的干预和治疗提供实验依据。为此,进行如下实验。方法: 1. 胎兔皮肤无瘢痕愈合模型的建立用小切口法对25 只妊娠20 天的胎兔背部致切割伤。其中5 只胎兔待其出生;其余术后24h 取创伤胎兔、同胞胎兔和其母兔皮肤组织,分别作为胎兔创伤（FT）组、胎兔对照（FC）组和成年创伤对照（ATC）组标本;用哺乳动物总蛋白提取试剂盒分别提取其皮肤组织的总蛋白;用Bradford 法进行浓度测定,以确定总蛋白样品上样体积。2. 皮肤总蛋白的双向电泳和差异蛋白质点的质谱分析选用pH 值4-7、长11cm 的IPG 胶条,加大电泳样品上样量,进行双向电泳,总聚焦60000Vh,用10%的聚丙烯酰胺凝胶作为分离胶,最后用硝酸银染色电泳凝胶。三组兔皮肤总蛋白双向电泳凝胶图分别用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件进行分析和比对,寻找各组皮肤组织特异高表达的蛋白质凝胶点。将皮肤差异表达的蛋白质点进行基质辅助的激光解析电离/飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrogram,MALDI-TOF-MS）分析,得到各蛋白点的肽指纹图谱,通过肽指纹图谱检索其相关蛋白,分析其功能。
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