论文摘要
目的：近年来,糖尿病（DM）发病率和死亡率日益升高,其中心血管并发症是导致DM患者死亡的主要原因之一。DM导致心血管疾病的机制是复杂的,其中血管内皮功能紊乱是发生心血管并发症的重要因素。因此,如何保护血管内皮成为对抗DM心血管并发症的新的研究靶点。川陈皮素是从橘皮中提取得到的一种黄酮类化合物,具有抗血细胞凝集、抗血栓形成、抗真菌、抗炎、抗过敏、抗癫痫等功效。但是,川陈皮素能否对抗高糖诱导下的内皮细胞损伤,目前国内外未见相关研究。本实验通过体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vascular Endothelial Cells, HUVEC）建立高糖损伤内皮细胞模型,探讨川陈皮素对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用。方法：本实验所用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）由山东大学附属山东省立医院中心实验室提供,选择生长良好的HUVECs用于试验。试验分组为：①正常对照组：用含有10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养液和终浓度为5.5 mmol/L的葡萄糖,与内皮细胞共同培养48h；②高糖组（HG）：用含有10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养液和终浓度为30mmol/L的葡萄糖,与内皮细胞共同培养48h；③高糖+川陈皮素组：用含有不同终浓度的川陈皮素（40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L,分别为标为A组、B组、C组、D组、E组）和内皮细胞预处理18h,然后加入终浓度为30mmol/L的葡萄糖,继续培养48h。在倒置相差显微镜下观察细胞形态,进行MTT光吸收检测法检测内皮细胞活力,细胞上清液中SOD活性和NO分泌量测定。所得数据采用SPSS18.0软件进行统计分析。结果：1. HUVECs细胞形态学变化正常对照组细胞生长状态良好,贴壁牢,细胞间连接紧密,细胞呈多角形或是梭形,边界清,大小均匀,胞浆丰富,呈单层铺路石样排列。高糖组细胞皱缩,变圆,细胞体积变小,细胞间隙增大,边界不清,并有较多细胞脱落。高剂量川陈皮素组（A组、B组、C组）与高糖组细胞相比,细胞形态有不同程度的改善,细胞间隙减小,胞间连接增多,大部分细胞恢复呈多角形或梭形。低剂量川陈皮素组（D组、E组）与高糖组比较,细胞形态改善不明显,细胞体积变小,胞间连接减少,边界不清,有较多细胞脱落。2.川陈皮素对高糖诱导HUVEC损伤的保护作用与正常对照组相比,高糖组HUVEC细胞活力（OD值）、总SOD活力和NO分泌量明显下降（P均<0.01）,而与高糖组相比,经不同浓度的川陈皮素作用后,HUVEC细胞活力（OD值）、总SOD活力和NO分泌量明显回升,并与川陈皮素呈浓度依赖性。其中高浓度川陈皮素组（A组、B组、C组）与高糖组比较有统计学意义（P<0.01）,而低浓度川陈皮素组（D组、E组）与无统计学意义（P>0.05）,。结论：1.高糖可诱导HUVEC活力下降,活性氧产生增多,抗氧化能力降低,导致HUVEC损伤。2.川陈皮素对体外高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与药物呈浓度依赖性。其作用机制可能与提高细胞清除活性氧能力以及促进NO分泌有关。