本文主要研究内容
作者赵鹏伟（2019）在《影响水牛精原细胞富集及体外增殖相关因素的初步研究》一文中研究指出：水牛是中国南方重要家畜之一,由于其繁殖效率低下及优秀种质资源缺乏,严重制约了水牛产业的发展。精原干细胞(Spermatogonial Stem Cells,SSCs)是动物种质资源改良和新品种培育最具潜力的种子细胞之一,已成为当前动物繁殖学领域研究的热点。目前小鼠SSCs体外培养系统已较成熟,但是水牛相关研究较少,已知的SSCs体外培养系统尚不能满足水牛SSCs体外长期培养需求。本研究拟通过探索影响水牛精原干细胞富集及体外增殖的相关因素,为优化当前水牛SSCs体外培养系统奠定基础。取得的主要研究成果如下:1.探讨了影响水牛支持细胞(sertoli)饲养层细胞制备的相关因素。水牛睾丸细胞悬液经差异贴壁6 h,对已贴壁细胞用sertoli细胞特异性抗体WT1免疫荧光染色并计数,其纯度可达95%以上。以不同浓度丝裂霉素C处理sertoli细胞,结果显示,3.0 μg/mL丝裂霉素C处理组细胞增殖显著低于对照组和1.5μg/ml裂霉素C处理组,但与其它处理组无显著差异,所以制备sertoli饲养层细胞的丝裂霉素C处理浓度以3.0 μg/ml为宜。收集不同代sertoli细胞(0-10代),采用qRT-PCR分析sertoli细胞特异表达基因,结果显示,P6、P7和P8代的sertoli细胞中GDNF表达量显著高于其它代细胞,而P7和P8代的SCF与FGF2表达量显著高于其它代细胞。2.观察了不同年龄水牛SSCs相关基因的表达状况。利用DDX4抗体与PGP9.5抗体对水牛睾丸组织SSCs进行定位,发现SSCs主要分布于曲细精管基底膜附近。采用qRT-PCR分析青春期前和成牛水牛睾丸细胞悬液SSCs相关基因的表达,结果显示青春期前睾丸细胞悬液Nanos2表达量显著高于成年水牛。水牛睾丸细胞悬液经明胶和鼠尾胶原蛋白差异贴壁富集SSCs细胞,结果显示富集后的细胞PGP9.5阳性细胞数量显著高于未差异贴壁组,并且经差异贴壁PGP9.5阳性细胞数量是未差异贴壁细胞的2.3倍。3.探讨了褪黑激素(Melatonin)和CHIR-99021(简称 CHIR)对SSCs体外增殖的影响。在IMDM培养系统中分别添加不同浓度褪黑激素或CHIR,SSCs经培养4天后传代,继续培养4天后,收集细胞,对SSCs干性及生殖相关基因(PLZF,DDX4,NANOS2)、分化相关基因(DMRT1,REC8,DAZL)、氧化相关基因(CAT,SOD3)和细胞增殖相关基因(CCND1,CCNE1)进行qRT-PCR分析,结果显示,与对照组相比,10-6MMelatonin处理组SSCs中PLZF、DDX4、SOD3表达量显著高于对照组;而DMRT1和REC8显著下调;CCND1基因表达在各组中无显著差异。10-6M Melatonin处理组与对照组的DDX4和PGP9.5阳性细胞数无显著差异。添加10 μM CHIR处理组SSCs中PLZF表达量极显著高于其它组,与对照组相比,NANOS2、CCND1、CCNE1表达量显著上调;DAZL、DMRT1、CAT和SOD3均显著下调。10μMCHIR处理组DDX4和PGP9.5阳性细胞数显著高于对照组,10 μM CHIR处理组阳性细胞数增加了1.7倍。
Abstract
shui niu shi zhong guo na fang chong yao jia chu zhi yi ,you yu ji fan shi xiao lv di xia ji you xiu chong zhi zi yuan que fa ,yan chong zhi yao le shui niu chan ye de fa zhan 。jing yuan gan xi bao (Spermatogonial Stem Cells,SSCs)shi dong wu chong zhi zi yuan gai liang he xin pin chong pei yo zui ju qian li de chong zi xi bao zhi yi ,yi cheng wei dang qian dong wu fan shi xue ling yu yan jiu de re dian 。mu qian xiao shu SSCsti wai pei yang ji tong yi jiao cheng shou ,dan shi shui niu xiang guan yan jiu jiao shao ,yi zhi de SSCsti wai pei yang ji tong shang bu neng man zu shui niu SSCsti wai chang ji pei yang xu qiu 。ben yan jiu ni tong guo tan suo ying xiang shui niu jing yuan gan xi bao fu ji ji ti wai zeng shi de xiang guan yin su ,wei you hua dang qian shui niu SSCsti wai pei yang ji tong dian ding ji chu 。qu de de zhu yao yan jiu cheng guo ru xia :1.tan tao le ying xiang shui niu zhi chi xi bao (sertoli)si yang ceng xi bao zhi bei de xiang guan yin su 。shui niu gao wan xi bao xuan ye jing cha yi tie bi 6 h,dui yi tie bi xi bao yong sertolixi bao te yi xing kang ti WT1mian yi ying guang ran se bing ji shu ,ji chun du ke da 95%yi shang 。yi bu tong nong du si lie mei su Cchu li sertolixi bao ,jie guo xian shi ,3.0 μg/mLsi lie mei su Cchu li zu xi bao zeng shi xian zhe di yu dui zhao zu he 1.5μg/mllie mei su Cchu li zu ,dan yu ji ta chu li zu mo xian zhe cha yi ,suo yi zhi bei sertolisi yang ceng xi bao de si lie mei su Cchu li nong du yi 3.0 μg/mlwei yi 。shou ji bu tong dai sertolixi bao (0-10dai ),cai yong qRT-PCRfen xi sertolixi bao te yi biao da ji yin ,jie guo xian shi ,P6、P7he P8dai de sertolixi bao zhong GDNFbiao da liang xian zhe gao yu ji ta dai xi bao ,er P7he P8dai de SCFyu FGF2biao da liang xian zhe gao yu ji ta dai xi bao 。2.guan cha le bu tong nian ling shui niu SSCsxiang guan ji yin de biao da zhuang kuang 。li yong DDX4kang ti yu PGP9.5kang ti dui shui niu gao wan zu zhi SSCsjin hang ding wei ,fa xian SSCszhu yao fen bu yu qu xi jing guan ji de mo fu jin 。cai yong qRT-PCRfen xi qing chun ji qian he cheng niu shui niu gao wan xi bao xuan ye SSCsxiang guan ji yin de biao da ,jie guo xian shi qing chun ji qian gao wan xi bao xuan ye Nanos2biao da liang xian zhe gao yu cheng nian shui niu 。shui niu gao wan xi bao xuan ye jing ming jiao he shu wei jiao yuan dan bai cha yi tie bi fu ji SSCsxi bao ,jie guo xian shi fu ji hou de xi bao PGP9.5yang xing xi bao shu liang xian zhe gao yu wei cha yi tie bi zu ,bing ju jing cha yi tie bi PGP9.5yang xing xi bao shu liang shi wei cha yi tie bi xi bao de 2.3bei 。3.tan tao le tui hei ji su (Melatonin)he CHIR-99021(jian chen CHIR)dui SSCsti wai zeng shi de ying xiang 。zai IMDMpei yang ji tong zhong fen bie tian jia bu tong nong du tui hei ji su huo CHIR,SSCsjing pei yang 4tian hou chuan dai ,ji xu pei yang 4tian hou ,shou ji xi bao ,dui SSCsgan xing ji sheng shi xiang guan ji yin (PLZF,DDX4,NANOS2)、fen hua xiang guan ji yin (DMRT1,REC8,DAZL)、yang hua xiang guan ji yin (CAT,SOD3)he xi bao zeng shi xiang guan ji yin (CCND1,CCNE1)jin hang qRT-PCRfen xi ,jie guo xian shi ,yu dui zhao zu xiang bi ,10-6MMelatoninchu li zu SSCszhong PLZF、DDX4、SOD3biao da liang xian zhe gao yu dui zhao zu ;er DMRT1he REC8xian zhe xia diao ;CCND1ji yin biao da zai ge zu zhong mo xian zhe cha yi 。10-6M Melatoninchu li zu yu dui zhao zu de DDX4he PGP9.5yang xing xi bao shu mo xian zhe cha yi 。tian jia 10 μM CHIRchu li zu SSCszhong PLZFbiao da liang ji xian zhe gao yu ji ta zu ,yu dui zhao zu xiang bi ,NANOS2、CCND1、CCNE1biao da liang xian zhe shang diao ;DAZL、DMRT1、CAThe SOD3jun xian zhe xia diao 。10μMCHIRchu li zu DDX4he PGP9.5yang xing xi bao shu xian zhe gao yu dui zhao zu ,10 μM CHIRchu li zu yang xing xi bao shu zeng jia le 1.7bei 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的赵鹏伟，发表于刊物广西大学2019-10-14论文，是一篇关于精原干细胞论文,水牛睾丸支持细胞论文,褪黑激素论文,广西大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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