论文摘要
目的:观察抗氧化酶PeroxiredoxinⅠ和Ⅱ（ PrxⅠ和Ⅱ）在昆明小鼠输卵管和子宫的分布及其周期性变化。观察PrxⅡ对昆明小鼠植入前胚发育和克服2-细胞阻滞的作用。方法:1.免疫组织化学方法观察PrxⅠ和Ⅱ在昆明小鼠输卵管和子宫的分布。2.蛋白免疫印迹技术检测PrxⅠ和Ⅱ在小鼠动情期和动情间期的表达变化。3.收集昆明小鼠1-细胞胚,采用微滴培养法连续培养,观察在M16培养液中添加PrxⅡ蛋白对植入前胚发育的影响,观察其是否能克服2-细胞阻滞。4.收集昆明小鼠（阻滞品系小鼠）和B6C3F1小鼠（非阻滞品系小鼠）1-细胞胚,采用微滴培养法连续培养,观察在M16培养液（37℃、5%CO2和饱和湿度培养条件下）各自的发育情况。5.应用激光共聚焦扫描显微镜技术结合特异性荧光探针2’, 7’二氯荧光黄双乙酸酯,检测昆明小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚以及昆明小鼠与B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内活性氧自由基（ROS）水平差异。结果:1.在输卵管中,PrxⅠ和Ⅱ免疫阳性反应见于输卵管上皮;而子宫内,PrxⅠ免疫阳性反应分布于内膜上皮、腺体上皮和内膜基质内细胞,而PrxⅡ主要见于内膜基质内细胞。2.蛋白免疫印迹技术也显示这两型蛋白在输卵管和子宫均表达,动情期和动情间期这两型蛋白在输卵管和子宫中的表达水平无显著性差异。3.昆明小鼠1-细胞胚在添加PrxⅡ蛋白的M16培养液中培养,其4-细胞胚发育率与对照组无显著性差异。4.昆明小鼠1-细胞胚在M16中培养多数停滞于2-细胞期,基本无法发育至囊胚;而B6C3F1小鼠1-细胞胚发育良好,绝大多数可越过2-细胞期且大多数可发育至囊胚,两者的4-细胞胚和囊胚发育率均有显著性差异。5.昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平显著低于体内发育2-细胞胚,差别有显著性意义;亦低于B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平,但差别无显著性意义。结论:抗氧化酶PrxⅠ与Ⅱ在输卵管和子宫中表达稳定,可能为受精和胚胎发育提供抗氧化的良好微环境。但是PrxⅡ对昆明小鼠植入前胚发育无明显作用,不能克服2-细胞阻滞,这可能是体外培养2-细胞胚内ROS并不高的缘故,提示正常培养条件下,胚内ROS水平升高或许并不是引起昆明小鼠2-细胞阻滞的主要原因。