FW523-3抗肿瘤作用及其机制的研究

论文摘要

FW523-3是一种脂肽类小分子化合物,来源于海洋青铜小单孢菌（Micromonospora chalcea）发酵液。以往研究表明,FW523-3与肿瘤抗生素Rakicidin B同质,能明显抑制小鼠肺成纤维细胞L929的生长增殖,抑制能力与紫衫醇相当;而与此同时,FW523-3还能够明显减小L929细胞核的大小,减少细胞内F-Actin量,减少线粒体的数量,降低线粒体膜电位,与紫杉醇的作用刚好相反。在此基础上,本文的目的是,阐明FW523-3的抗肿瘤作用及其机制。采用MTT法检测发现,FW523-3能明显抑制EC109、A549、95D、SGC7901、HeLa、HepG2、Vero和3T3等细胞的增殖,其抑制效果具有剂量效应和一定的时间效应,但是对CHO和SHEEC等细胞的抑制作用不明显。同时还发现FW523-3能剂量依赖性地抑制EC109细胞集落形成。以EC109细胞为模型,用0.5μg/ml、0.25μg/ml、0.125μg/ml三种浓度的FW523-3作用EC109细胞48 h后,光镜观察发现,细胞变圆,体积变小,折光性下降,分泌颗粒增多,边界不清。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,0.5μg/ml FW523-3作用EC109细胞48 h后,出现了明显的DNA梯状条带,表明发生了细胞凋亡。而流式细胞术的结果显示,0.5μg/ml的FW523-3作用EC109细胞48 h后,出现了明显的凋亡峰,也表明经FW523-3处理后发生了细胞凋亡,凋亡率达到19.22±1.02%。最后用Western blotting方法检测发现,FW523-3能激活Caspase-9,级联激活caspase-7和caspase-3,但是对caspase-8、caspase-12和Fas没有影响;FW523-3还可以下调ERK1/2和p38,同时抑制p-ERK的活性,但是对p-JNK没有影响;FW523-3可以上调ATF3和CYR61蛋白的表达,下调CTGF蛋白的表达。另外,用前述高中低三种浓度的FW523-3处理EC109细胞48 h后,用F-actin荧光染色的方法发现,FW523-3能减少细胞向外放射状突起的肌动蛋白丝;而黏附实验发现,FW523-3能显著降低肿瘤细胞和基质的黏附能力。综上所述可见,FW523-3的抗肿瘤作用机制可能主要涉及,1)激活细胞凋亡线粒体途径,2)抑制细胞信号转导蛋白p38和ERK的表达,3)影响细胞骨架系统,降低细胞黏附性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略词简表
• 第一章 绪论
• 1.1 肿瘤流行病学状况
• 1.2 肿瘤治疗的新靶点：细胞凋亡
• 1.3 细胞凋亡的生物学特征和机制
• 1.4 FW523-3 的研究背景
• 1.5 本项研究课题的基金来源及相关课题情况
• 1.6 本项研究课题的研究意义
• 1.7 研究目标与研究内容
• 第二章 材料方法
• 2.1 材料
• 2.2 技术路线
• 2.3 实验方法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 FW523-3 体外抗肿瘤作用
• 3.2 FW523-3 体外抗肿瘤作用的机制
• 第四章 讨论
• 4.1 FW523-3 诱导肿瘤细胞凋亡
• 4.2 FW523-3 激活细胞凋亡的线粒体途径
• 4.3 FW523-3 影响MAPKs家族蛋白的表达
• 4.4 FW523-3 影响CYR61 和CTGF的表达
• 4.5 小结
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表论文情况
• 个人简介