肌肽含量测定与手性拆分方法的研究

论文摘要

L-肌肽（L-Carnosine）是由β-丙氨酸和L-组氨酸构成的二肽（β-Ala-L-His）,它广泛存在于机体的各器官组织,特别在肌肉、脑、眼晶状体中可高达20 mmol/L。L-肌肽有多种生理活性,生理pH缓冲作用、螯合金属离子、清除自由基、抗氧化等。近年来又在医药方面多有应用:如含肌肽的滴眼液能明显改善随年龄增加的视力减退（老花眼）及减轻视觉疲劳,并对白内障有治疗作用,也可作为治疗胃溃疡的药物等。同时有相当多关于肌肽应用于实验动物模型治脑、肾、心脏缺血和糖尿病等方面的报告。肌肽也可作为食品添加剂、强壮剂、护肤剂等。近年来对于肌肽药理作用及其作用机理方面的研究较多,对于其含量测定方法国内研究较少,对其手性拆分方法未见报道。本研究采用2,4-二硝基氯苯作为柱前衍生试剂建立了测定肌肽原料药含量的RP-HPLC法。采用DiamonsilTMC18柱（200 mm×4.6 mm,5μm）,以0.15 mol/L乙酸盐缓冲溶液-乙腈（5∶1,v/v）为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温35℃,线性范围为2.0～20.0μg/mL（r=0.9999）,平均回收率分别为99.8%（RSD=0.4%）。该方法简便、准确、重复性好,为肌肽原料药质量控制提供方法。建立了高效毛细管电泳法（HPCE）测定肌肽含量的方法。采用石英毛细管柱（有效长度55 cm）,以100 mmol/L硼酸缓冲盐为运行缓冲溶液,检测波长200 nm,电压10 kV,柱温20℃。对肌肽进行含量测定,其线性范围为40.0～100.0μg/mL（r=0.9991）,平均回收率为105.7%（RSD=1.2%）。该方法具有操作简便,耗费低等优点,是检测痕量肌肽的颇有应用前景的分析方法。本研究应用柱前手性衍生化反相高效液相色谱法,以邻苯二甲醛（OPA）和N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）为柱前手性衍生化试剂,建立了分离D,L-肌肽手性对映体的方法,色谱条件:Cromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,柱温25℃,流速1.0 mL/min,流动相采用甲醇-0.05 mol/L乙酸盐缓冲溶液（pH 6.0）（30∶70,v/v）,紫外波长345 nm。15 min内即可分离肌肽对映体,D-肌肽浓度在2.0～20.0μg/mL（r=1）浓度范围内与其衍生化物峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为0.04%（n=9）。通过此方法,将D-肌肽和L-肌肽异构体可以完全分离,并建立了肌肽右旋异构体的检查方法,该法灵敏度高,重现性好,可用于原料药中D-肌肽的限量检查。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 肌肽研究概况
• 1.2 化学衍生法
• 1.3 毛细管电泳技术
• 1.4 手性药物及研究概况
• 1.5 手衍生化法
• 1.6 立题目的和研究思路
• 第二章 柱前衍生RP-HPLC法测定肌肽含量方法的研究
• 2.1 2,4二硝基氯苯柱前衍生化法测定肌肽含量
• 2.2 小结
• 第三章 高效毛细管区带电泳法测定肌肽含量方法的研究
• 3.1 HPCE法测定肌肽含量
• 3.2 小结
• 第四章 柱前手性衍生法拆分肌肽对映体方法的研究
• 4.1 肌肽对映体的拆分
• 4.2 L-肌肽原料药中D-肌肽杂质的检查
• 4.3 小结
• 第五章 结果与讨论
• 参考文献
• 附录
• 个人简历
• 致谢