脑缺血神经细胞和星形胶质细胞死亡途径及EPO干预研究

论文摘要

目的 通过观察大鼠持续性局灶脑缺血后细胞形态学的变化、免疫组化的表达,明确脑缺血后神经细胞和星形胶质细胞的死亡途径及EPO对细胞死亡的影响,为脑缺血治疗寻求新的契机。 方法 78只SPF级雄性SD大鼠,随机分为5组:假手术组6只,电镜对照组2只,免疫组化实验组30只,电镜实验组10只,药物干预组30只。采用颈内动脉线栓环扎法建立大鼠大脑中动脉持续性缺血模型。药物干预组缺血30min后腹腔注射EPO。各实验组大鼠分别于缺血3h、6h、12h、24h、48h取脑,假手术组和对照组为术后24h取脑。电镜组直接断头取脑,单片脑组织TTC染色定位取缺血中心区和边缘区脑组织,LKB5超薄切片枸橼酸铝和醋酸铀染色,JEOL100透射电镜下观察;其余各组以固定液灌注取脑,常规固定包埋切片,HE、TUNEL和GFAP染色,假手术组和实验组还行GFAP、TUNEL双标免疫组化染色,通过图像分析观察以上指标表达情况。 结果 光镜下缺血3h即可见中心区脑组织轻度疏松和细胞肿胀,随缺血时间延长胶质细胞肿胀明显,12h后星型胶质细胞难以辨认,神经细胞核变形,核固缩,可见大量深染的神经细胞,正常组织及细胞结构渐消失。缺血3h边缘区可见细胞周围间隙扩大,神经细胞和胶质细胞肿胀,随缺血时间延长神经细胞周围水肿明显加重,核固缩,星形胶质细胞增生。电镜下可见星形胶质细胞在中心区和边缘区均呈现细胞肿胀情况,中心区缺血12h可见核膜破裂,染色质漏出。缺血3h中心区可见神经细胞核染色质疏松、边聚,胞浆内可见空泡状的线粒体,缺血6h即可见肿胀和固缩的神经细胞。6h后仅见固缩的神经细胞。缺血边缘区3—6h可见肿胀和固缩的神经细胞,6h后多为固缩的神经细胞,细胞损伤程度呈不一致性。免疫组化:实验组缺血3h中心区及边缘区均可见TUNEL阳性细胞,以边缘区为主,随缺血时间延长边缘区阳性细胞数渐增加,中心区TUNEL阳性细胞递减,缺血24h后中心区罕见阳性细胞。药物干预组TUNEL阳性细胞数较同时间点实验组阳性细胞数明显减少(P<0.05)。假手术组偶见TUNEL阳性细

论文目录

• 英文缩略词
• 摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1.1 细胞死亡进展
• 1.1.1 凋亡
• 1.1.2 胀亡
• 1.1.3 凋亡、胀亡与坏死的关系
• 1.1.4 展望
• 1.2 缺血区的概念
• 1.2.1 缺血中心区
• 1.2.2 缺血半影区
• 1.2.3 缺血边缘区
• 1.3 脑细胞的主要组成、作用及死亡研究意义
• 1.4 星形胶质细胞的标记蛋白
• 1.5 神经细胞和星形胶质细胞死亡途径的研究进展
• 1.5.1 神经细胞死亡途径现状
• 1.4.2 星形胶质细胞死亡途径现状
• 1.6 脑缺血后脑细胞死亡途径研究的重要性
• 1.7 EPO的研究进展
• 1.8 目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 实验器械与仪器
• 2.1.4 实验所需主要溶液及配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 动物模型的制备
• 2.2.2 动物模型成功的判定标准
• 2.2.3 实验动物的分组
• 2.2.4 实验动物的处理
• 2.2.5 实验标本的制备
• 2.3 数据处理
• 3 结果
• 3.1 形态学结果
• 3.2 免疫组化结果
• 3.3 药物干预组情况
• 4 讨论
• 4.1 大鼠脑缺血模型的建立
• 4.2 星形胶质细胞死亡途径
• 4.3 神经细胞死亡途径
• 4.4 两种死亡途径的影响及意义
• 4.5 药物干预对细胞死亡的影响
• 4.6 展望
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录：在校期间发表论文
• 附图