论文摘要
本试验利用放射受体分析法检测几种人类肿瘤细胞（HeLa宫颈癌、SK-BR3 乳腺腺癌、A549 肺癌、HepG2 肝细胞癌、A375 恶性黑色素瘤）细胞膜上的黑素刺激素受体（MC1R）蛋白在体外与高比活125I-αMSH的结合特性,来检测这几种人类肿瘤细胞表面上MC1R 蛋白的表达情况。结果显示,A375 细胞膜上的受体蛋白可与αMSH 配体结合。HeLa细胞、SK-BR-3 细胞、A549 细胞、HepG2 细胞未检测出可与αMSH 配体结合的受体蛋白。根据实验一的结果,利用RT-PCR 方法来验证人恶性黑色素瘤A375 细胞表面上MC1R 的存在。RT-PCR 结果显示,扩增产物的大小与MC1R 的cDNA 相符。测序结果表明,扩增片段为MC1R 基因的特异片段,证实人恶性黑色素瘤A375 细胞有MC1R mRNA 的表达。测序正确后将MC1R 基因克隆至表达载体质粒PET20B,将重组质粒PET20B-MC1R 转入受体菌BL21（DE3）中,SDS-PAGE 检测表达产物,含重组质粒PET20B-MC1R 的菌体诱导后在SDS-PAGE 上出现一条新生蛋白带,相对分子质量为35kd,但表达的MC1R 蛋白没有生物学活性。然后又利用Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统进行了MC1R 基因在Sf-9 细胞中的表达研究。结果显示,Bacmid-MC1R 质粒转染Sf9 细胞后的SDS-PAGE 在相对分子质量为35kd 处有一条蛋白带,说明MC1R 基因在杆状病毒中得到成功表达。而且经转染的sf-9 昆虫细胞中表达的MC1R 具有生物学活性。
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