西瓜杂种一代种子纯度SSR鉴定的研究

论文摘要

目前,西瓜杂种一代品种已广泛应用于生产。但在人工制种过程中,由于隔离不严或人工取雄不及时、不完善、不彻底等原因,常混有母本自交系或其他种子等假杂种给农业生产造成损失。因此,杂交种种子在包装销售前必须通过纯度检测。本研究使用SSR分子标记方法对西瓜杂交一代品系（XY-1）进行了种子纯度鉴定研究,结论如下:1)本试验以完全展平的西瓜子叶为研究材料,采用CTAB法提取细胞总DNA。实验证明用CTAB法所得DNA产率和纯度都较高,片段较大,适宜做SSR分析。2)通过试验,确定了适合西瓜的最佳PCR反应成分（包括dNTP、引物、DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶等的浓度组合）,并通过对变性、退火、延伸时间,退火温度和循环次数等参数的优化,确定了相对比较省时有效的扩增程序,最终得到了一个重复性好、清晰度高、比较理想的SSR-PCR扩增体系。3)本试验经过多次尝试,发现硝酸银染色时间、染色后漂洗时间以及显影时间和温度,玻璃板处理情况,PCR产物上样量以及电压高低等因素都会对其造成很大的影响。经过改善各种条件后聚丙烯酰胺电泳条带完整,清晰,易于观察记录,准确度较高。未经过改变条件的聚丙烯酰胺电泳条带发虚,弯曲,背景较深,有干扰带,条带连在一起。在进行SSR分析时,误差较大,使结果变得不准确。4)利用20对引物对西瓜杂种一代品系（XY-1）进SSR标记,并从中筛选出1对适合做上述品种种子纯度鉴定的具有多态性引物。用该引物对100粒F1代种子进行了纯度鉴定,结果显示其纯度是97%。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 种子纯度鉴定的类型
• 1.1 形态标记
• 1.2 细胞学标记
• 1.3 蛋白质标记
• 1.4 DNA 标记
• 1.4.1 多态性与分子标记
• 1.4.2 分子标记技术的类型
• 1.4.2.1 RFLP 标记技术
• 1.4.2.2 VNTR 标记技术
• 1.4.2.3 RAPD 标记
• 1.4.2.4 DAF 标记
• 1.4.2.5 ISSR 标记
• 1.4.2.6 SSR 标记
• 1.4.2.7 SCAR 标记
• 1.4.2.8 AFLP 标记
• 2 遗传标记在种子纯度研究中的应用
• 2.1 形态标记在种子纯度研究中的应用
• 2.2 生化标记在种子纯度中研究中的应用
• 2.2.1 同工酶标记在种子纯度中研究中的应用
• 2.2.2 种子贮藏蛋白标记在种子纯度鉴定中研究中的应用
• 2.3 分子标记技术在甜瓜、西瓜上种子纯度研究上的应用
• 2.3.1 概述
• 2.3.2 种质资源遗传多样性与亲缘关系
• 2.3.3 遗传图谱的构建
• 2.3.4 目标性状的连锁分子标记与分子标记辅助育种
• 2.3.5 品种及杂交种纯度鉴定
• 2.3.6 展望
• 2.4 本研究的立题依据
• 2.4.1 目的意义
• 2.4.2 具体研究内容
• 2.4.3 本研究的技术路线
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 所用仪器
• 2.1.2 植物材料
• 2.1.3 SSR 引物
• 2.1.4 试剂及药品配置
• 2.1.4.1 主要试剂
• 2.1.4.2 DNA 提取及检测所用试剂的配置
• 2.1.4.2.1 DNA 提取及检测所用相关试剂
• 2.1.4.2.2 聚丙烯酰胺（PAGE）电泳所用的相关试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 基因组DNA 的提取
• 2.2.2 模板DNA 样品浓度及质量检测
• 2.2.3 SSR 扩增反应体系的优化
• 2.2.4 SSR 扩增产物的 2.5%的琼脂糖凝胶电泳检测
• 2.2.5 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（12.0%）检测
• 2.2.5.1 胶板的制备
• 2.2.5.2 电泳
• 2.2.5.3 银染
• 2.2.6 多态性引物的筛选
• 2.2.7 多态性引物在杂种纯度检测中的的应用
• 2.2.8 数据分析和拍摄照片
• 第三章 结果与分析
• 3.1 DNA 的提取
• 3.2 SSR 反应体系的建立
• 3.2.1 退火温度
• 3.2.2 3′和5′段引物
• 3.2.3 模板DNA
• 3.2.4 DNTPS
• 2+'>3.2.5 MG²⁺
• 3.2.6 TAQE 酶
• 3.2.7 SSR 反应体系的确立
• 3.3 西瓜杂交种种子纯度的真实性检测
• 3.3.1 SSR 引物的筛选
• 3.3.2 西瓜杂交组合及其亲本20 对SSR 引物的筛选
• 3.4 杂交西瓜品种种子纯度的鉴定
• 第四章 讨论
• 4.1 影响SSR 稳定性的因素和技术体系优化
• 4.2 SSR 引物筛选及标记检测技术
• 4.3 SSR 在杂交西瓜品种鉴定和纯度分析上应用的可行性
• 第五章 结论
• 5.1 建立了能够明显提高SSR 扩增稳定性的技术体系
• 5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳条件优化
• 5.3 筛选出了在西瓜杂交种之间表现出多态性的SSR 特异引物
• 5.4 SSR 标记技术应用于西瓜杂种纯度真实性鉴定
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 导师简介