苦参碱对肾小球硬化大鼠肾脏保护作用的研究

论文摘要

目的: 建立肾小球硬化大鼠模型,通过观察各组动物24小时尿蛋白、尿素氮（BUN）血肌苷（Scr）,肾脏病理改变、计算肾小球硬化指数（SI）及肾小球中Ⅳ型胶原（CoⅣ）、转化因子-β1（TGF-β1）水平表达,研究苦参碱对肾小球硬化大鼠肾脏是否具有保护作用和可能机制。 方法: 1 动物模型及分组 雄性Wister大鼠56只,体重150±10g。每组自由饮水及进食。适应1周后,随机分为对照组A、B,每组8只;模型组A、B,每组10只;治疗组A、B,每组10只。对照组A为正常对照组;对照组B摘除左侧肾脏组。摘除左侧肾脏时每只大鼠以1%戊巴比妥钠0.5ml/kg腹腔注射麻醉,经背部切口摘除左侧肾脏。左肾摘除后分别于第7、14天两次由尾静脉注射柔红霉素5mg/Kg。治疗组自第二次注射柔红霉素第二日起,每日腹腔注射苦参碱注射液,A组四周,B组八周。150克大鼠腹腔注射苦参碱剂量为3mg,1.5ml。在治疗组注射苦参碱的同时,余组注射等剂量的生理盐水1.5ml。 ①对照组A:正常组+生理盐水8周,n=8;对照组B:单肾切除组+生理盐水8周,n=8; ②模型组A:单肾切除组+柔红霉素+生理盐水4周,n=10;模型组B:单肾切除组+柔红霉素+生理盐水8周,n=10; ③治疗组A:单肾切除组+柔红霉素+苦参碱4周,n=10;治疗组B:单肾切除组+柔红霉素+苦参碱8周,n=10。 注射四周后模型组A、治疗组A入代谢笼留24小时尿样,上法腹腔麻醉,经腹主动脉插管采血。取肾,置4%多聚甲醛溶液。8周后同法处置余组大鼠。 2 指标检测 ①二十四小时尿蛋白,常规比色法。 ②BUN采用酶法,Scr采用苦味酸法。 ③肾脏病理检查:光镜检查:取肾后肾组织固定于多聚甲醛液中常规制片,切片厚度3μm,PAS染色,观察形态学改变;HPIAS-1000高清晰度医学彩色病理图像分析系统,每张标本400倍高倍镜下顺序观察皮质部分10个肾小球,计算肾小球硬化指数。 ④免疫组化检测肾组织（SABC法）TGF—β1、CoⅣ:一抗,小鼠抗人和大鼠Ⅳ型胶原;二抗,生物素化山羊抗小鼠IgG,使用DAB显色试剂盒显色。严格按照试剂盒说明操作。用HPIAS1000高清晰度彩色病理图像测量系统,在400倍下行病理图像分析,每个标本分别取5个大小相近的肾小球,分别测定TGF—β1、CoⅣ的染色面积和强度,并求其均值。 结果: 1 二十四小时尿蛋白（24hupQ）及血生化: ①对照组B与对照组A（正常对照组）之间24小时尿蛋白、BUN、Scr相比均无显著差异（P>0.05）;②治疗组、模型组各组大鼠24小时尿蛋白、BUN、Scr与对照组A相比均有极显著增高（P<0.01）;③治疗组24小时尿蛋白、BUN、Scr均较同期相应模型组显著降低（P<0.05或P<0.01）。 2 肾组织学检查 ①PAS染色显示:模型组出现肾小球系膜基质中、重度扩张,伴节段性及球性肾小球硬化,部分球囊粘连,肾小管灶状萎缩,间质可见有核细胞浸润。而治疗组系膜基质扩张相对较轻。湖北中医学院硕士沦文 ②肾小球硬化指数:对照组无肾小球硬化;模型组及治疗组均有不同程度肾小球硬化情况;治疗组肾小球硬化指数较同期相应模型组显著降低印<0 .05或1,< 0.01)。 3工V型胶原含量: ①对照组B与对照组A之间lV型胶原含量相比无显著差异（尸>（） .05）; ②治疗组、模型组各组大鼠lV型胶原含量与对照组A比较有显著差异（P<0.01）; ③治疗组W型胶原含量均较同期相应模型组显著降低（尸<0 .05或P< 0.01）。 4TGF一pl蛋白水平: ①对照组B与对照组A之间tlUF一pl蛋白水平表达较弱,两者无显著差异 （P）0 .05): ②治疗组、模型组各组大鼠‘fGF一p,蛋白水平表达与对照组A比较有显著差异（P<0 .01）; ③治疗组TGF一p,蛋白水平表达均较同期相应模型组显著降低（p<0.05或P<0 .01）。结论: l苦参碱有降低24hupQ、BuN、Ser的作用; 2苦参碱有降低肾小球硬化大鼠肾小球系膜病变,缓解’{于小球硬化,降低肾小球硬化指数的作用; 3苦参碱有有减低肾小球硬化大鼠1V型胶原、TGF一日l蛋白水平表达的作用。 提示苦参碱对肾小球硬化大鼠肾脏具有保护作用。其机制可能与减轻尿蛋白,降低IV型胶原、TGF一日,蛋白水平表达有关,阻断了一系列连锁反应,减轻ECM的过度蓄积,缓解了肾小球硬化,保护了肾功能。关键词:苦参碱肾小球硬化IV型胶原TGF一p

论文目录

• 综述
• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 实验研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 1 关于动物模型的选择
• 2 祖国医学对肾小球硬化的认识
• 3 现代医学对肾小球硬化的认识
• 4 选择苦参碱的原因
• 5 苦参碱对肾小球硬化大鼠肾脏的保护作用
• 6 苦参碱对肾小球硬化大鼠肾脏保护作用的机制探讨
• 参考文献
• 结语
• 附图
• 致谢