手霉素及其与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞3AO作用机制的研究

论文摘要

目的:研究手霉素（Manumycin）及其与抗癌药物顺铂（DDP）联合应用对人卵巢癌细胞3AO的体外抑制作用,分析手霉素抑制3AO细胞的增殖及诱导其凋亡的可能机制,探讨手霉素用于卵巢癌临床治疗的可行性。方法:1体外培养人卵巢癌细胞3AO,采用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay, MTT）比色法检测手霉素对该细胞增殖的影响。2流式细胞术（flow cytometry, FCM）测定手霉素对3AO细胞周期分布和凋亡的影响。3经Giemsa染色光学显微镜观察3AO细胞的形态学改变,透射电镜观察3AO细胞的超微结构改变。4提取手霉素作用前后3AO细胞的DNA,进行琼脂糖凝胶电泳分析。5流式细胞术间接分析手霉素处理后3AO细胞Survivin、NF-κB（P65）蛋白的表达水平。6 MTT比色法检测手霉素与顺铂联合应用对3AO细胞增殖的抑制作用,采用金氏公式分析相互作用指数（Interaction Index）,评价两药联合应用后的作用,如相互作用指数>0.85表示相加作用,相互作用指数<0.85为拮抗作用。结果:1不同浓度的手霉素（5、10、20、40、80μmol/L）对3AO细胞的增殖可产生抑制作用,随着手霉素浓度的增加,抑制作用逐渐增强,而且随着手霉素作用时间的延长,抑制作用也逐渐增强,有显著性差异（P<0.05）。即手霉素对3AO细胞增殖的抑制作用呈明显的时间-剂量依赖关系。2 0、5、10、20、40、80μmol/L的手霉素作用48h后的3AO细胞,随着药物浓度的增大,G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显,该作用呈剂量-效应依赖关系。0、5、10、20、40、80μmol/L的手霉素处理3AO细胞48h后,细胞发生明显的凋亡现象,且随着手霉素浓度的增加,凋亡率逐渐增强,细胞凋亡百分率分别为1.73%、2.39%、3.76%、14.37%、28.86%、36.32%。3光学显微镜下观察未经手霉素作用的对照组3AO细胞呈长梭形或菱形,形态饱满;而手霉素作用48h后的3AO细胞皱缩,破裂,呈不规则形,有的细胞两端出现细长的伪足,细胞胞浆中出现空泡,脱落细胞增多。Giemsa染色后光学显微镜下显示,对照组3AO细胞呈长梭形或菱形,形态饱满,细胞核染色均匀,核仁清晰可见,未见凋亡细胞出现;而手霉素作用48h后的3AO细胞变圆,胞质浓缩,核着色不均匀,出现核分裂现象,呈现凋亡细胞的形态学改变。透射电镜下观察3AO细胞的形态显示,手霉素作用48h后的3AO细胞超微结构发生明显改变,如细胞体积缩小,胞质浓缩,胞核向外呈锐角突起,染色质高度浓缩,电子密度增高,边集于核膜下或呈新月状,有的出现核固缩。4提取手霉素作用48h后3AO细胞的DNA,经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现典型梯状电泳条带,细胞DNA降解为有规律大小的片段,而对照组细胞则无降解现象发生。5 0、10、20、40μmol/L的手霉素处理48h后,3AO细胞的Survivin、NF-κB（P65）表达随处理浓度增大而逐渐降低,表达量明显下降,比较对照组和处理组的蛋白表达,差异均具有显著性（P<0.05）。6手霉素与顺铂联合应用对3AO细胞增殖有明显的抑制作用,10、20、40μmol/L的手霉素可加强顺铂对3AO细胞增殖的抑制作用。且随着手霉素浓度的增大,其与顺铂的相加作用亦逐渐增强。金氏公式分析结果表明10、20、40μmol/L的手霉素联合不同浓度的顺铂相互作用指数均>0.85。结论:1手霉素具有抑制卵巢癌细胞3AO的增殖及诱导其凋亡的作用,为卵巢癌的临床治疗提供了理论依据和实验基础。2手霉素具有抑制3AO细胞的增殖、诱导其凋亡的作用,初步推测其机制在于:1)下调3AO细胞的Survivin蛋白表达,影响细胞周期进程,使3AO细胞阻滞于G2/M期。2)下调3AO细胞的NF-κB（P65）蛋白的表达,NF-κB（P65）的下调可能增强3AO细胞对手霉素的敏感性,进而抑制3AO细胞的增殖并诱导凋亡。3手霉素与顺铂联合应用可增强对3AO细胞的增殖抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 法尼基转移酶抑制剂抗肿瘤作用的研究进展
• 致谢
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