80～200日龄绵羊羔羊消化器官及淀粉酶基因多态性研究

论文摘要

研究品种和日龄对绵羊羔羊消化器官发育、胰腺消化酶活性的影响,并研究了不同绵羊品种淀粉酶基因的多态性,旨在为我国肉羊生产,绵羊品种资源的选育和利用提供参考。选择60日龄小尾寒羊、滩羊和蒙古羊各40只作为研究对象,在相同的饲养管理条件下,分别于80、120、160和200日龄,各品种选择体重相近的10只个体屠宰,比较三个品种绵羊主要消化器官的生长发育规律,并选取淀粉酶（AMY）基因为候选基因,对其进行基因多态性研究,研究其作为候选基因进行分子标记的可行性,得出如下结果:1.消化器官发育:绵羊品种与日龄对绵羊羔羊体重、日增重和相对生长速率均有显著影响（P<0.05）。三品种相比,小尾寒羊的日增重最大,蒙古羊最小,小尾寒羊的相对生长速率最高,蒙古羊的相对生长速率最低。日龄对胃、肝、小肠增重影响显著（P<0.05）,对胰腺增重影响不显著（P>0.05）。2.胰腺消化酶活性:三品种羔羊的胆汁、瘤胃、皱胃与空肠在80200日龄阶段的pH值差异均未达到显著水平（P>0.05）。200日龄时小尾寒羊和滩羊胆汁、空肠、十二指肠的pH值均大于蒙古羊。80200日龄阶段,三品种羔羊的胰淀粉酶和胰脂肪酶活性随着日龄增加逐渐升高,在160日龄时达到最大值,随后下降,三品种羔羊各日龄间均差异不显著（P >0.05）。200日龄时,小尾寒羊的淀粉酶和胰蛋白酶活性均显著大于滩羊和蒙古羊（P<0.05）。3.根据已公布的绵羊AMY基因序列,分别在第一外显子和5’端、第七外显子、第八外显子和第十外显子筛选4个位点（A1、A7、A8、A10）设计引物,并进行PCR扩增,均得到特异性扩增结果。经检测A1、A7和A10位点存在多态性,均存在三个基因型AA、BB和AB型,其中AA型为野生型,AB型为杂合子,BB型为突变基因型。4.本研究对3个多态位点进行基因频率卡方检验,发现A1位点在小尾寒羊和蒙古羊群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态;A7位点在三个群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态;A10位点仅在小尾寒羊群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态;蒙古羊在A7和A10位点的多态信息含量和信息熵均大于其他2个群体,证明其具有丰富的遗传基础。5.将3个含有多态基因型的位点（A1、A7、A10）与3个品种绵羊的淀粉酶活性进行相关性分析,结果如下:在小尾寒羊群体中,A7位点多态性与淀粉酶活性存在相关性,各基因型均值差异显著,其中AA基因型对应最小二乘均值最大,可作为小尾寒羊的标记基因型;在滩羊群体中,A10位点多态性与淀粉酶活性存在相关性,各基因型均值差异显著,其中AA基因型对应最小二乘均值最大,可作为滩羊的标记基因型;在蒙古羊群体中,A1位点多态性与淀粉酶活性存在相关性,各基因型均值差异显著,其中AA基因型对应最小二乘均值最大,可作为蒙古羊的标记基因型。

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摘要

ABSTRACT

第一章文献综述

1.1 反刍动物消化器官生长发育研究进展

1.1.1 反刍动物消化器官发育规律

1.1.2 影响反刍动物消化器官发育的因素

1.1.3 影响消化酶活性的因素

1.2 淀粉酶基因多态性研究进展

1.2.1 淀粉酶简介

1.2.2 淀粉酶基因（AMY）的多态性

1.2.3 分子标记技术——SNP 技术简介

第二章 80～200 日龄绵羊羔羊消化器官发育规律研究

2.1 材料与方法

2.1.1 试验动物

2.1.2 样品采集

2.1.3 测定指标与测定方法

2.1.4 数据处理与统计分析

2.2 结果与分析

2.2.1 羔羊生长性能的比较

2.2.2 羔羊主要消化器官重量的变化

2.2.3 羔羊消化器官pH 的变化

2.2.4 羔羊胰腺消化酶活性的变化

2.3 讨论

2.3.1 消化酶活性测定技术的优化

2.3.2 羔羊生长性能的比较

2.3.3 羔羊主要消化器官重量的变化

2.3.4 羔羊消化道不同部位内容物pH 的变化

2.3.5 羔羊胰腺主要消化酶活性的变化

2.4 小结

第三章绵羊淀粉酶基因多态性研究

3.1 材料与方法

3.1.1 样品来源与数量

3.1.2 血样的采集及预处理

3.1.3 主要仪器设备和试剂

3.1.4 主要试剂

3.1.5 血液基因组DNA 的提取（酚-氯仿抽提法）

3.1.6 DNA 浓度和纯度的检测

3.1.7 引物设计与合成

3.1.8 PCR 扩增反应及其反应程序

3.1.9 数据统计

3.2 结果与分析

3.2.1 基因组DNA 样品的检测

3.2.2 基因SNP 的检测

3.2.3 PCR-SSCP 结果

3.2.4 PCR 产物测序结果

3.2.5 基因多态基因座的群体遗传学分析

3.2.6 绵羊AMY 基因多态性与其淀粉酶活性的相关性分析

3.3 讨论

3.3.1 PCR-SSCP 技术的优化

3.3.2 绵羊AMY 基因不同位点的群体多态性分析

3.4 小结

第四章结论

参考文献

致谢

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