论文摘要
目的:因为DEL型红细胞膜上的D抗原数量非常少,只有通过敏感的吸收放散试验才能检出。近年来,DEL的临床输血安全问题受国际关注,日本和韩国先后报道了“亚洲型”DEL导致RhD阴性患者产生的抗-D免疫反应（初次和回忆反应）,国内仅2001年观察到1例真实RhD阴性患者输注DEL红细胞后产生抗-D同种抗体,但更多文献报道真实RhD阴性患者在接受DEL供者红细胞后没有发生输血反应,也未检测到抗-D。我们追踪临床接受DEL红细胞的RhD阴性患者20例,观察临床输血反应,检测其血清中有无抗-D抗体的产生,探讨DEL型个体弱表达D抗原的临床免疫原性。方法:1.供者DEL红细胞的筛查。RhD-DEL型是从血清学角度定义的,由IAT确认的RhD阴性经吸收-放散试验检测为D抗原阳性。我们对供者血细胞采用血型血清学检测,包括盐水法、间接抗人球蛋白法、吸收放散试验筛选DEL型红细胞。DEL红细胞临床相关的抗原主要有D、C、c、E和e等5种,可以采用相应的单克隆抗血清来鉴定。2.输注DEL型红细胞的RhD阴性患者血型鉴定和抗-D抗体检测。为了观察DEL表达D抗原的免疫原性,我们追踪临床接受DEL红细胞的RhD阴性患者,采集患者输血后6个月内的EDTA﹒K2抗凝血,共20例,男10例,女10例,年龄为14～78岁,平均38.75岁。对患者红细胞采用血型血清学检测（包括盐水法、抗人球蛋白法、吸收放散试验）和血型的分子生物学检测。分子生物学检测采用天根血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA,采用试剂盒Ready gene Drag（inno-Trin Blood Group SSP） PCR-SSP扩增,产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,通过凝胶成像仪成像。对患者血清采用凝聚胺法、间接抗球蛋白试验和微柱凝胶法筛查不规则抗体,然后对筛查阳性的标本通过谱细胞进行不规则抗体鉴定,并进行效价滴定。结果: 1. 2010年1月至2011年3月安徽省血液中心献血者共检测421例RhD确认阴性标本。吸收放散试验检出DEL 108例,比例为25.6%;RhD真阴性313例,比例为74.4%。对108例DEL样本进行RhCcEe因子测定,结果显示85.2%的样本中含有C抗原。2.20例患者红细胞血清学检测5例为DEL型,占25%;15例为RhD真阴性,占75%。PCR-SSP扩增显示5例DEL型都含有RhD基因（K409K）。5例DEL型患者无论男女都未检测出抗-D抗体,抗-D抗体阳性的患者都为RhD真阴性。患者血清检测出2例女性标本不规则抗体为阳性,效价分别为32和512,所有男性血清中都未发现不规则抗体。谱细胞鉴定不规则抗体都为抗-D抗体。其中1例为第一次输血的妊娠女性,22岁,其儿子血样RhD为阳性,提示母体内抗体可能为妊娠引起;另1例女性,36岁,输DEL红细胞前后其血清抗-D抗体都为阳性,调查其病历发现生育史5次,曾于1997年产下一女婴,女孩健在,此次输入DEL 2u,也未发生输血反应,输血前后抗-D抗体效价都为512,胆红素也未见明显变化,输血2周后出院。结论:1.“亚洲型”DEL表型个体通常为C抗原阳性个体,C抗原可作为初筛“亚洲型”DEL的1个重要标志。2.在本次调查的20例样本中, DEL型的个体未检出抗-D抗体,产生抗-D抗体的个体未检出DEL型,提示DEL个体可能不会被诱导产生同种免疫抗-D抗体。3.本次调查所有男性RhD阴性患者接受DEL红细胞后都未产生抗-D抗体,1例含有抗-D抗体的RhD真阴性女性接受DEL红细胞后临床也未出现输血反应,提示DEL红细胞导致RhD阴性受者产生同种免疫反应几率可能很低。