茄子花药培养体系的构建

论文摘要

在花药培养阶段选择4个茄子品种（绿罐茄（4号）、精选绿茄（6号）、航天紫冠王（19号）、新济杂长茄九号（29号））为试验材料,对其进行花药愈伤组织的诱导,愈伤组织的增殖及不定芽分化试验,目的是构建一套较完备的茄子花药培养体系。具体的试验结果分述如下:1花蕾长度、花蕾直径、花冠长度、萼裂基部长度、花药长度、花蕾颜色、花药颜色、花萼开裂程度等绝对数值可以做为辅助的指标来确定花蕾外形与花粉发育时期之间的对应关系,但用来直接判断两者之间的对应关系并不可靠。判断花蕾外形与花粉发育时期之间对应关系较为可靠和直接的方法是利用花冠长度和萼裂基部长度之差这一相对数值,如果花冠长度小于萼裂基部长度,则大部分花粉处于四分体时期;如果花冠长度大于萼裂基部长度,并且这个差值在00.2cm之间时,大部分花粉处于单核中晚期;如果这个差值大于0.2cm时,大部分花粉处于双核期或已成熟。2对两个参试品种进行68d的36℃高温预处理可以明显地提高愈伤组织诱导率,但4号品种反应较为迟钝,19号品种反应较为敏感。对两个参试品种进行先4d 4℃低温处理再48d的36℃高温处理的变温预处理,同样可以显著提高愈伤组织诱导率。3两个参试品种对不同温度预处理方式的反应有差异,4号品种进行短期的低温处理再进行高温处理可以明显地缩短高温处理的时间,19号品种进行变温预处理的效果反而不如单独进行高温预处理的效果。4两个参试品种的花药愈伤组织诱导最适宜的激素组合是:0.2mg/L 2.4-D+0.5mg/L ZT。在此激素组合的作用下,两参试品种6号和29号的愈伤组织诱导率分别达到了19.77%和36.10%。5不论是愈伤组织诱导还是不定芽诱导,添加ZT的培养基诱导率都比添加KT的培养基诱导率有显著提高。特别是在不定芽诱导上,添加KT的培养基诱导率全部为0,而添加了ZT的培养基在4个参试品种中都有不定芽形成,特别是对4号品种,添加ZT的两个培养基,3号和4号,不定芽诱导率分别达到了62.5%和20%。其它3个参试品种在添加ZT的培养基上不定芽诱导率仍不是很高,最佳的激素组合还有待进一步研究确定。6基因型对茄子花药离体培养影响很大。本试验中,参试的几个品种对不同的温度预处理方式、不同的激素组合（包括愈伤组织诱导及不定芽的诱导）的反应,表现在诱导率上差异很大。比较各个参试品种总愈伤组织诱导率,紫茄品种19号、29号的诱导率要明显地好于青茄品种4号和6号,其中19号参试品种的愈伤组织诱导率最高,达到18.8%,并且愈伤组织形成时间也最短,其它几个品种愈伤组织形成时间相对较长。在愈伤组织的增殖效果上,不同的基因型间也表现出很大的差异性,4号参试品种的增殖转化率最高,达到了38.8%,而愈伤组织诱导率最高的19号品种,在增殖转化率上反而最低,只有9.52%。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 单倍体概述
• 1.2 单倍体的起源
• 1.2.1 自然产生单倍体
• 1.2.2 人工诱发获得单倍体
• 1.2.2.1 离体雄核发育
• 1.2.2.2 雌核发育
• 1.2.2.3 其它单倍体诱导途径
• 1.3 单倍体材料的应用
• 1.3.1 作物育种
• 1.3.2 物种进化研究
• 1.3.3 遗传分析
• 1.3.4 分子生物学研究
• 1.3.5 突变体筛选
• 1.3.6 消除致死基因
• 1.3.7 遗传转化的受体材料
• 1.4 离体花粉单倍体的发育途径
• 1.4.1 花粉正常的发育途径
• 1.4.2 离体花粉单倍体发育途径
• 1.4.2.1 营养细胞发育途径
• 1.4.2.2 生殖细胞发育途径
• 1.4.2.3 营养细胞和生殖细胞并进发育途径
• 1.4.2.4 花粉均等分裂途径
• 1.5 茄子花粉单倍体成苗途径
• 1.6 茄子单倍体培养影响因素
• 1.6.1 供体植株因素
• 1.6.1.1 基因型
• 1.6.1.2 花粉的发育时期
• 1.6.1.3 花粉的生理状态
• 1.6.2 培养技术因素
• 1.6.2.1 花蕾消毒方法
• 1.6.2.2 预处理
• 1.6.2.3 基本培养基
• 1.6.2.4 激素组合
• 1.6.2.5 糖
• 1.6.2.6 培养基添加物
• 1.6.2.7 培养方式
• 1.6.2.8 培养环境条件
• 1.6.2.9 其它因素
• 1.7 茄子花药、花粉单倍体育种存在问题及展望
• 1.7.1 存在问题
• 1.7.2 展望
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 试验时间和场所
• 3.1.2 供体植株材料
• 3.1.3 主要试验设备
• 3.1.4 各种试验试剂的配制
• 3.1.4.1 固定液及染色液的配置
• 3.1.4.2 培养基母液的配制
• 3.1.5 培养基的配制
• 3.1.6 培养容器的选择
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 花蕾外形和花粉发育时期对应关系的观察
• 3.2.1.1 材料的选取和固定
• 3.2.1.2 制片方法
• 3.2.1.3 测定方法
• 3.2.2 温度预处理
• 3.2.2.1 处理方法
• 3.2.2.2 激素设置
• 3.2.2.3 愈伤组织选择
• 3.2.2.4 高温预处理
• 3.2.2.5 变温预处理
• 3.2.3 激素处理
• 3.2.3.1 处理方法
• 3.2.3.2 处理设置
• 3.2.4 愈伤组织增殖
• 3.2.4.1 增殖方法
• 3.2.4.2 增殖培养基设置
• 3.2.4.3 处理方法
• 3.2.5 不定芽诱导
• 3.2.5.1 处理方法
• 3.2.5.2 处理设置
• 3.2.6 再生芽的继代培养
• 4 结果与分析
• 4.1 花蕾外形与花粉发育时期对应关系的观察
• 4.1.1 绝对数值比较
• 4.1.2 相对数值比较
• 4.2 温度预处理对茄子花药愈伤组织形成的影响
• 4.2.1 高温预处理对茄子花药愈伤组织形成的影响
• 4.2.2 变温预处理对茄子花药愈伤组织形成的影响
• 4.2.3 高温预处理与变温预处理的处理效果比较
• 4.3 不同的激素处理组合对茄子花药愈伤组织形成的影响
• 4.4 不同品种愈伤组织形成情况综合分析
• 4.5 不同品种的增殖效果分析
• 4.6 不同的不定芽诱导培养基对不定芽产生的影响
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 5.2.1 基因型对花药培养效果的影响
• 5.2.2 花蕾外形与花粉发育时期的对应关系
• 5.2.3 花药的预处理
• 5.2.4 愈伤组织的增殖处理
• 5.2.5 诱导培养基中激素的选用
• 5.2.6 抗生素的添加与花药培养
• 5.2.7 培养机理研究与花药培养
• 5.2.8 茄子花药培养的直接成胚研究
• 5.2.9 花药培养过程中体细胞愈伤组织的干扰
• 5.2.10 培养基的更换周期对花药培养的影响
• 5.2.11 愈伤组织分切对花药培养的影响
• 5.2.12 不定芽继代时基部愈伤组织对不定芽生长的影响
• 参考文献
• ABSTRACT
• 图版
• 缩略词表