厚皮甜瓜果实RNA的提取及采后硅酸钠处理对其防卫基因的诱导表达

论文摘要

随着甜瓜采后诱导抗病性研究的深入,对防卫基因的诱导表达分析已成为亟待研究的内容。本文以厚皮甜瓜“银帝”（Cucumis melo L. cv. Yindi）为材料,对果实RNA的提取方法主要条件进行了筛选,并对果实中7个防卫基因在100mmol硅酸钠处理和Trichothecium roseum挑战接种下的表达模式进行了分析。结果表明:1.1ml Trizol提取200mg果实量时可得到最多的RNA量,氯仿抽提2次可使所提取RNA的A260/A280在1.9-2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染。室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显差异。提取的RNA可顺利反转录,反转录产物稀释5倍后扩增β-actin基因片段与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR。2.cDNA模板量在经过几次调整后,基本达到均一化,用标准Marker比较法验证了MCHT、PAL、SOD、POD、APX和LOX基因,用测序比对的法验证了CHS基因,并得到了甜瓜CHS基因片段序列。由此表明,用标准Marker比较法和测序比对的法可验证扩增的基因,设计的引物可做表达分析。3.硅酸钠处理和处理后的挑战接种提前了MCHT和SOD基因表达高峰2d,而且也提高了表达量;处理后的挑战接种提高了PAL和CHS基因的表达量;处理后POD基因表达高峰延长了2d,提高了挑战后POD基因表达量;APX和LOX基因表达明显可被硅酸钠处理抑制。由此表明,硅酸钠处理后诱导了果实的抗病性。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 文献综述
• 1 硅的存在及分布
• 2 硅对作物病害的影响
• 3 硅提高植物抗病性的机理
• 4 抗病相关基因及RT-PCR 技术应用
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 TRIZOL 用量对RNA 提取效果的影响
• 3.2 氯仿抽提和沉淀条件对RNA 提取效果的影响
• 3.3 RT-PCR 体系的建立
• 3.4 半定量RT-PCR 的模板均一化
• 3.5 MCHT、PAL、SOD、POD、APX 和LOX 基因扩增验证
• 3.6 CHS 基因片段的获得
• 3.7 基因表达模式分析
• 4 讨论
• 4.1 RNA 的提取和RT-PCR 体系建立
• 4.2 半定量RT-PCR 的模板均一化
• 4.3 甜瓜果实防卫相关基因的验证
• 4.4 甜瓜果实防卫相关基因的表达分析及抗病机理
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介