扇贝多肽调节ASMase/JNK/COX-2通路抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

论文摘要

目的复制UVA诱导的HaCaT角质形成细胞的凋亡模型,从酸性鞘磷脂酶（acidsphingomyelinase,ASMase）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun NH2-terminal kinase,JNK）和环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）的角度,研究扇贝多肽（Polypeptide fromChlamys farreri,PCF）抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法复制8J·cm-2 UVA照射HaCaT细胞后的最佳凋亡模型,根据实验设计分为:对照组、UVA模型组、阳性对照组(5.68 mmol·L-1维生素C,检测细胞凋亡时应用该组)、药物组(5.68 mmol·L-1 PCF、2.84 mmol·L-1IPCF、1.42 mmol·L-1PCF)、抑制剂组(25μmol·L-1Desipramine、20μmol·L-1SP600125、1μmol·L-1 celecoxib)。琼脂糖凝胶电泳分析PCF、ASMase抑制剂（Desipramine）、JNK抑制剂（SP600125）及COX-2特异性抑制剂（celecoxib）对细胞凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色观察UVA引起的细胞凋亡形态学改变及PCF对凋亡的影响;应用RT-PCR和免疫荧光染色检测ASMase的表达;蛋白质印迹法检测ASMase、JNK、磷酸化JNK蛋白的表达;Perfect Real Time PCR检测c-jun mRNA的表达;RT-PCR结合蛋白质印迹法检测COX-2的表达。结果1.42～5.68 mmol·L-1剂量范围内的PCF可明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡（P＜0.05）,对UVA引起的核固缩等细胞凋亡形态学改变有显著抑制作用;预先加入Desipramine、SP600125和celecoxib可明显抑制UVA诱导的HaCaT细胞DNA Ladder的形成;1.42～5.68 mmol·L（-1）剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的ASMase、c-jun和COX-2的表达以及JNK的活化（P＜0.05,P＜0.01）。结论PCF可抑制8J·cm-2UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机理与抑制UVA诱导的ASMase---JNK/c-jun---COX-2通路的激活有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1.1 主要试剂和材料
• 1.2 细胞株
• 1.3 仪器设备
• 第二章 实验方法
• 2.1 细胞培养及实验设计
• 2.2 试验项目和指标检测
• 2.3 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 PCF对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的抑制作用
• 3.2 PCF抑制ASMase的表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.3 PCF抑制JNK的活化而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.4 PCF对UVA诱导的HaCaT细胞内c-jun mRNA表达的影响
• 3.5 PCF抑制COX-2的表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.6 附图
• 第四章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述的参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢