论文摘要
背景和目的急性心肌梗死（acute myocardial infartion，AMI）后心室重塑（ventricular remodeling）是心室大小、形态、结构和功能变化的过程，包括梗死区心肌坏死产生膨出，非梗死区心肌肥大和成纤维细胞的增殖及间质胶原的增生、纤维化，最终导致心力衰竭。心室重塑是一复杂的病理生理过程，至今其机制尚未完全阐明。近年来，众多细胞和炎症因子在心室重塑发生机制中的作用受到重视。心肌营养素-1（Cardiotrophin-1，CT-1）是一种新近发现的细胞因子，属于白介素-6（interleukin-6，IL-6）超家族。已有的研究提示，CT-1在AMI后心室重塑中起着重要作用。一方面它可直接促使心肌细胞肥大和成纤维细胞生长、迁移、分泌Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原。另一方面，CT-1增加局部血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）生成，通过肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）过度激活，进一步加重心室重塑。他汀类药物能改善心肌梗死后心力衰竭大鼠模型左室重塑和功能，但他汀类药物对大鼠AMI后CT-1和AngⅡ的影响尚未见报道。本实验通过建立大鼠心肌梗死模型，观察AMI后CT-1mRNA、AngⅡ、BNP mRNA（心肌肥厚标志基因）和Ⅰ型胶原的变化及它们之间的相互关系，初步探讨阿托伐他汀干预对它们的影响，为他汀类药物改善AMI后心室重塑提供新的理论依据。材料与方法（1）模型制作与分组健康清洁级雄性Wistar大鼠65只，体重240±20g，随机分为假手术组（n=15）和AMI组（n=50）；AMI组通过结扎左冠状动脉前降支（LAD）制作AMI模型，24h后存活36只，再随机分为心梗对照组（n=18）和阿托伐他汀干预组（n=18）。阿托伐他汀干预组每日给以阿托伐他汀（40mg／kg）灌胃，持续4周，假手术组和心梗对照组每日给以等量生理盐水灌胃。（2）超声心动图测定左室心功能大鼠麻醉后，采用二维超声心动图，探头频率10MHz，采用标准的左室长、短轴切面，测定左室舒张末期内径（LVEDd）、左室短轴缩短率（FS）、射血分数（EF）。（3）免疫组化染色测定心肌组织Ⅰ型胶原产量心肌组织石蜡包埋后连续切片，分别行HE染色及脱蜡水化，滴加稀释的一抗、二抗，用DAB显色、封片。采用图像分析软件在显微镜下分析，镜下观察棕黄色为阳性。（4）放射免疫法测定心肌中AngⅡ浓度左室非梗死区心肌按要求研磨成匀浆，煮沸、低温离心后，取上清液采用放射免疫法测定心肌中AngⅡ浓度。（5） SYBR Green I Real Time PCR检测各组大鼠心肌组织中CT-1、BNPmRNA的表达①总RNA的提取；②逆转录聚合酶链反应；③标准曲线绘制及SYBRReal Time PCR反应：以cDNA为模板，加入相应的引物及SYBR Premix Ex TaqTM，在Gene Amp 5700 Sequence Detector仪上分别对CT-1、BNP和管家基因GAPDH（内参）进行扩增，将扩增产物倍比稀释成5个不同浓度的标准品，制作CT-1、BNP和GAPDH标准曲线；将待测样品与标准品同时在Real Time PCR仪（型号同上）上反应，将所得不同Ct值分别代入各自的标准曲线，电脑自动读出各样品的起始模板量。再将各样品CT-1、BNP基因定量结果与GAPDH基因定量结果相比进行RNA校正，即可得到各组大鼠心肌组织中CT-1、BNPmRNA的相对表达量。结果（1）一般情况：4周后，各组大鼠存活情况分别为假手术组14只、心梗对照组13只、阿托伐他汀干预组14只。3组大鼠体重无显著性差异（P值均＞0.05）；心梗对照组和阿托伐他汀干预组大鼠心脏重量、左室重量、心脏重量指数和左室重量指数均明显高于假手术组（P值均＜0.05），而阿托伐他汀干预组大鼠上述各指标较心梗对照组显著降低（P值均＜0.05）。（2）左心功能情况：4周后超声心动图显示的各组大鼠左心功能情况为：心梗对照组和阿托伐他汀干预组LVEDd明显高于假手术组（P值均＜0.05），而LVEF和FS明显低于假手术组（P值均＜0.05）；与心梗对照组相比，阿托伐他汀干预组LVEDd显著降低（P值＜0.05），LVEF和FS明显升高（P值均＜0.05）。（3）心梗对照组和阿托伐他汀干预组与假手术组相比，左室非梗死区Ⅰ型胶原产生、AngⅡ的浓度、CT-1mRNA、BNPmRNA的表达均明显增高（P值均＜0.05），而阿托伐他汀干预组上述指标均明显低于心梗对照组（P值均＜0.05）。（4） Pearson直线回归分析表明：心梗对照组和阿托伐他汀干预组心肌组织中CT-1mRNA与BNPmRNA表达均呈正相关（r=0.747，；r=0.650，P值均＜0.05）、CT-1mRNA表达与Ⅰ型胶原的生成亦均呈正相关（r=0.687，；r=0.698，P值均＜0.05）。心梗对照组和阿托伐他汀干预组心肌组织中CT-1mRNA表达与左室非梗死区中AngⅡ浓度的变化也呈正相关（r=0.571，；r=0.651，P值均＜0.05）。结论（1）阿托伐他汀能够抑制心肌梗死后心室重塑，改善心功能；（2） CT-1参与了心肌梗死早期的心室重塑过程；（3）阿托伐他汀可下调大鼠心肌中CT-1mRNA、BNPmRNA的表达，减少Ⅰ型胶原的产生；（4） AngⅡ参与了心肌梗死后CT-1介导的心室重塑，但其因果关系不能确定。
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