CD147siRNA转染对银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和基质黏附能力的影响

论文摘要

目的研究CD147siRNA转染对寻常型银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和细胞外基质黏附能力的影响。旨在进一步明确CD147分子在银屑病发病中的作用机制,探讨将CD147作为靶分子,运用siRNA技术对银屑病进行基因治疗的可行性。方法1、收集门诊确诊为寻常型银屑病患者10例,抽取外周血20 mL,密度梯度离心法分离外周血单一核细胞（PBMC）;通过葡萄球菌肠毒素B（SEB）和人重组白细胞介素2（rIL-2）共同培养5天后采用流式细胞仪检测T细胞纯度为（92.88±1.81）%;2、将化学合成的CD147siRNA电转染至T细胞中,采用半定量RT-PCR法检测转染后96小时内转染细胞中CD147 mRNA表达水平的变化;3、采用MTT法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后T细胞增殖水平的变化;4、运用流式细胞仪法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞活化标记分子CD25表达的影响;5、采用基质黏附实验检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞胞外基质黏附能力的影响。结果1.转染CD147siRNA 1 24、48和72 h后,T细胞中CD147 mRNA表达水平均降低（P均＜0.05）,以转染后48小时下降最为显著（P＜0.001）,干扰效率为（62.87±5.5）%;而转染后96 h恢复至接近转染前水平（P＞0.05）;转染CD147siRNA 2 48小时后,CD147mRNA表达水平降低,干扰效率为（10.2±3.1）%（P＜0.05）,其余时间点无显著下降（P＞0.05）;2.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的增殖能力显著降低（P均＜0.001）,其抑制率分别为（44.5±3.13）%、（50.7±3.5）%、（53.98±4.15）%;3.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞表面CD25分子的表达水平由（80.2±4.8）%、（81.6±3.35）%、（83.5±4.1）%下降到（47.23±3.65）%、（31.5±4.22）%、（23.05±4.15）%（P均＜0.001）;4.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的胞外基质黏附能力显著降低（P值分别＜0.01、＜0.001、＜0.001）,下降率分别为（29.8±4.66）%、（43.53±3.88）%、（56.5±4.13）%。结论1.建立了针对人外周血T细胞进行siRNA瞬时转染的实验方法;2.CD147分子与银屑病患者外周血T细胞的增殖、活化和基质黏附能力相关,可能是一种新的银屑病治疗靶分子。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、缩略语表
• 四、论文正文
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 主要试剂的配制
• 1.4 实验方法
• 1.5 统计学分析
• 第二章 结果
• 2.1 不同siRNA剂量的转染效率
• 2.2 CD147 siRNA转染对T细胞中CD147 mRNA表达的抑制作用
• 2.3 CD147 siRNA转染抑制T细胞增殖能力
• 2.4 CDl47 siRNA转染抑制T细胞活化
• 2.5 CD147 siRNA转染抑制T细胞对纤连蛋白的黏附
• 第三章 讨论
• 五、结论
• 六、参考文献
• 七、综述
• 八、致谢
• 九、攻读学位期间主要的研究成果