河南省小麦根腐线虫病原鉴定和RAPD分析

论文摘要

小麦根腐线虫病是一种严重的小麦病害,在国外已经带来了严重的经济损失,2006年,在河南农业大学科技园区小麦的根部发现一种小麦新病害—小麦根腐线虫病,在河南省内还是首次发现短体线虫对小麦造成危害。调查研究发现在2007年郑州市小麦根腐线虫病对小麦造成13.58%~15.46%的产量损失。本研究利用形态学和分子生物学相结合的方法对小麦根腐线虫的病原种进行了鉴定,结果表明,造成此病害的病原线虫为敏捷短体线虫(Pratylenchus agilis)。对其他作物的危害在国内外都有报道,但是对小麦的危害还是首次发现。本研究对河南省部分地区的小麦根腐线虫进行了初步的调查。通过对河南省荥阳、开封县等14个地县45个采样点的小麦根腐线虫的初步调查,其中9个地区34样点分离出小麦根腐线虫。而在驻马店、周口和中牟县的小麦的根内和土壤中都没有分离出根腐线虫,而在其他的地区都分离出了小麦根腐线虫,说明此线虫在河南省的分布较为普遍,呈现不均匀分布。对35个采样点筛选出23个有代表性的点进行形态学和分子鉴定,鉴定结果表明,在这些采样点中,有2种不同的短体线虫对小麦根部造成危害,其中15个样品鉴定为敏捷短体线虫(Pratylenchus agilis),8个样品鉴定为卢斯短体线虫(Pratylenchus loosi)。采用RAPD技术,对分离自郑州、新乡、焦作、安阳等具有地域代表性的9个地区13个线虫种群进行了遗传多样性分析。从100条随机引物中筛选出10条多态性较好的随机引物。共扩增出85条RAPD标记,其中81条为多态性标记。说明河南省小麦根腐线虫病原线虫存在着丰富的遗传多样性。利用NTSYS软件进行了病原线虫的聚类分析,结果表明,13个样品中的病原线虫聚为2类,形态学和分子生物学鉴定的敏捷短体线虫聚为一类,卢斯短体线虫聚为一类。种间的遗传相似系数的变化幅度为0.51～0.86。来自同一个地区的小麦根腐线虫病原线虫基本上聚在了一起,表现出很近的亲缘关系。病原线虫遗传多样性分析的结果与形态鉴定和分子鉴定的结果基本一致,这样也进一步验证了形态学和分子生物学的鉴定结果。

论文目录

• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 小麦寄生线虫的研究概况
• 1.1.1 小麦寄生线虫的研究进展
• 1.1.2 短体线虫的形态特征
• 1.1.3 小麦短体线虫病害的研究进展
• 1.1.4 小麦根腐线虫病害的症状与诊断
• 1.1.4.1 小麦根腐线虫的症状
• 1.1.4.2 小麦根腐线虫的诊断
• 1.1.5 小麦根腐线虫病的防治
• 1.2 短体线虫鉴定的研究进展
• 1.2.1 短体线虫病原形态鉴定的研究进展
• 1.2.1.1 光学显微镜观察
• 1.2.1.2 电子显微镜观察
• 1.2.1.3 短体线虫的生物学特性
• 1.2.1.4 短体线虫的寄主范围
• 1.3 短体线虫分子鉴定的研究进展
• 1.3.1 rDNA-ITS 区序列分析法
• 1.3.2 限制性片段长度多态性技术（RFLP）
• 1.3.3 随机扩增多态性DNA（RAPD）
• 1.3.4 单链构象多态性（SSCP）
• 1.3.5 荧光定量PCR 技术（Real-time PCR）
• 1.3.6 其他的PCR 检测技术
• 2 引言
• 3 材料和方法
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 供试材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要试剂的配制
• 3.1.4 主要仪器设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 线虫的分离与玻片制作方法
• 3.2.2 形态学分类依据
• 3.2.3 DNA 的提取
• 3.2.4 感受态细胞的制备
• 3.2.5 电泳检测、拍照
• 3.2.6 引物筛选
• 3.2.7 电泳检测及拍照
• 3.2.8 数据处理及RAPD 分析
• 4 结果与分析
• 4.1 ZZMZ 种群病原线虫种的鉴定
• 4.1.1 ZZMZ 种群线虫形态数据的测量值
• 4.1.2 ZZMZ 种群线虫形态描述
• 4.1.3 ZZMZ 种群线虫与一些已鉴定的相近的短体线虫的形态测量值的比较
• 4.1.4 ZZMZ 种群线虫的分子鉴定结果
• 4.2 河南小麦根腐线虫的调查与鉴定
• 4.2.1 调查河南省小麦根腐线虫的分布结果
• 4.2.2 鉴定过程中出现的区别于ZZMZ 种群的病原线虫的形态特征描述
• 4.2.3 分子鉴定结果
• 4.3 河南省不同地区小麦根腐线虫的RAPD 分析
• 5 结论与讨论
• 5.1 河南省郑州市小麦根腐线虫病原鉴定结果
• 5.2 河南省不同地区的小麦根腐线虫病原鉴定
• 5.3 河南省部分地区线虫的RAPD 分析
• 参考文献
• ABSTRACT