甲状腺癌特异性高甲基化基因蛋白水平筛查研究

论文摘要

目的:选择腺癌特异高甲基化候选基因,开展甲状腺病变组织免疫组化筛查,通过蛋白表达分析,寻找甲状腺癌发生与蛋白表达缺失的关系,为甲状腺癌的基因甲基化研究提供特异、敏感的指标。方法:1)本课题选择5种文献报道确认的腺癌异常性甲基化基因(CDH1、MLH1、TIMP3、ESR1和MGMT);2)应用免疫组织化学方法检测腺癌特异高甲基化基因在71例甲状腺癌、26例甲状腺腺瘤、15例桥本氏甲状腺炎、10例结节性甲状腺肿及12例正常甲状腺组织中的蛋白表达水平;3)建立一种稳定、安全提取石蜡组织中高质量DNA的方法,优化甲基化PCR的条件。结果:1)CDH1、MLH1蛋白表达水平在甲状腺病变中表达差异均有统计学意义(P<0.05),随着甲状腺病变恶性程度升高呈降低趋势,同时CDH1蛋白表达水平降低与PTC和FTC的临床分期、淋巴结转移密切相关;2)ESR1、MGMT蛋白表达水平在甲状腺病变中有差异,随着甲状腺病变恶性程度升高呈上升趋势,并与甲状腺癌组织学类型相关,均有统计学意义(P<0.05),同时ESR1蛋白表达水平升高与甲状腺癌的临床分期及淋巴结转移密切相关;3)TIMP3蛋白表达水平随着甲状腺病变恶性程度升高呈降低趋势,但无统计学意义(P>0.05);4)在甲状腺癌中,MLH1分别与CDH1、TIMP3蛋白表达水平,MGMT与ESR1蛋白表达水平,均呈正相关(P<0.05);5)5例甲状腺髓样癌中,CDH1蛋白均表达,ESR1蛋白表达缺失,3例甲状腺低分化癌中,CDH1及ESR1蛋白均表达,TIMP3蛋白表达缺失;6)在甲状腺癌中CDH1、MLH1、TIMP3、ESR1和MGMT蛋白在性别、年龄和民族组中表达均无差异。结论:1)CDH1、MLH1及TIMP3蛋白低表达可能与甲状腺癌发生、转移有关;2)ESR1蛋白高表达与甲状腺癌发生有关,并提示预后良好,阻断其作用环节可能为甲状腺癌提供新的治疗方法;3)MGMT蛋白高表达现象可能与甲状腺癌恶性程度有关,可作为候选临床分子诊断指标;4)在甲状腺癌中,MLH1与CDH1、TIMP3,MGMT与ESR1之间蛋白表达有一定的相关性;5)甲状腺癌组织的CDH1、MLH1、TIMP3、ESR1及MGMT蛋白在性别、年龄和民族组表达均无差异,有望成为共用检测指标;6)蛋白水平筛选出CDH1、MLH1及TIMP3基因作为甲状腺癌特异性高甲基化基因来进行甲基化分析。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 甲状腺癌特异性高甲基化基因的免疫组化筛选与鉴定
• 资料与方法
• 1. 材料
• 1.1 标本来源
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器
• 2. 方法
• 2.1 标本切片制备
• 2.2 染色步骤
• 2.3 染色结果判断
• 2.4 临床分期
• 2.5 预后指标
• 2.6 技术路线
• 2.7 统计分析
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 甲状腺癌特异性高甲基化基因的DNA 甲基化初步摸索
• 材料与方法
• 1. 材料
• 2. 方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表