论文摘要
目的:探讨兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）体外分离培养、诱导分化为脂肪细胞及成骨细胞的方法,并研究其生物学特性,为组织工程及干细胞药理学研究奠定实验基础。方法:采用体外细胞培养技术自兔股骨、胫骨及肱骨中分离BMSCs进行纯化、培养。用地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、吲哚美辛定向诱导BMSCs分化为脂肪细胞,油红-O染色鉴定。用地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C定向诱导BMSCs分化为成骨细胞,NBT/BCIP染色法、P-对硝基苯基质法及茜素红染色法检测BMSCs的成骨能力。 结果:原代及传代培养显示,兔BMSCs具有活跃的增殖能力。成脂诱导72h后,细胞内有脂滴出现,随着诱导时间的延长,脂滴逐渐增加并融合为脂泡,细胞形态由梭形转变为类圆形或多角形,第3周油红-O染色显示80%以上的BMSCs转变为脂肪细胞。成骨诱导第1～5天,培养的细胞增殖旺盛,3～5天即可融合成单层,随着诱导时间的延长,细胞增殖速度减慢,出现细胞聚集的现象,培养细胞逐渐汇合呈铺路石状,细胞形态变为胞体较小的立方形,继续诱导,可出现多角形成骨样细胞,胞外基质分泌逐渐增多,胶原堆积、钙盐沉积,10～12天形成不透光矿化结节,ALP活性增高,茜素红染色阳性,表示BMSCs向成骨细胞分化。结论:应用本实验方法培养的兔BMSCs,体外生长稳定、增殖速度快、贴壁率高、可连续传代;经体外诱导可以向脂肪细胞、成骨细胞分化。
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