心力衰竭大鼠模型血清抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体亚类水平的变化规律

论文摘要

研究背景及目的心力衰竭（heart failure,HF）患者存在心肌损伤、坏死和凋亡。心肌肌凝蛋白（cardiac myosin,CM）是心肌收缩的主要蛋白,其结构已清,各同功酶及各片段功能复杂。诸多研究证明[1-9],心肌肌凝蛋白重链具有很强的抗原性和免疫原性。免疫机理几乎参与或影响所有的心血管疾病。抗心肌肌凝蛋白自身抗体参与了心衰的进展[10-14],但抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体（anti-cardiac myosin heavy chain autoantibody, AMCHA）AMCHA亚类水平的变化规律及与心功能的关系意义不明。本试验拟在心力衰竭大鼠模型上测定慢性心衰时期AMHCA亚类的血清水平,观察心衰时期大鼠血清AMHCA亚类水平的动态变化规律,分析血清AMHCA亚类水平与心衰不同时期的关系,探讨免疫参与心衰病理生理过程的机制,以期为提高心衰预防和诊断水平以及从免疫学角度及时实施有效的干预等提供依据。实验方法第一部分:慢性心力衰竭大鼠模型的建立应用腹主动脉缩窄法建立慢性心力衰竭（chronic heart failure, CHF）大鼠模型,并以超声心动、血流动力学、病理检查及免疫组化进行评价,确定CHF大鼠的入选诊断标准。第二部分: AMHCA亚类血清水平的测定1、血清采集:大鼠适应性饲养10-14天;分别于术前、术后第7、20、50、90、120、150、180天对存活大鼠经内眦静脉采血。分离血清,- 20℃下冻存,用于自身抗体检测。2、间接酶联免疫吸附Indirect-ELISA（Indirect-enzyme linked immunosorbent assay）方法测大鼠血清各亚类IgG AMHCA。实验结果1、假手术组3月和6月LVPWD、IVS、LVESD、LVEDD、EF、FS各项指标与正常对照组比较,没有统计学差异。手术组3月时大鼠LVPWD、IVS、LVESD、LVEDD均增加,EF、FS降低,其中除了LVEDD的增加与正常对照组有显著差异以外,其余指标与正常对照组比较无显著差异。6月时手术组大鼠的LVSED、LVEDD、LVPWD、IVS增加,EF、FS降低,较正常对照组组有统计学差异（P﹤0.05）。2、假手术组3月和6月时LVEDP、LVSP、±dp/dt max与以及HR各项指标与正常对照组比较,差异没有统计学意义。3月时手术组大鼠LVSP、±dp/dtmax均减小,但与正常对照组相比没有明显统计学差异（P﹥0.05）,LVEDP升高水平与正常对照组相比具有统计学差异（P﹤0.05）;6月LVSP,±dp/dtmax下降,HR增快、LVEDP升高,与正常对照组比较有统计学差异（P﹤0.05）。3、假手术组心肌组织无病理变化。手术组3月大鼠左心室心肌细胞明显肥厚、增宽,胞核浓染、增大,心肌细胞排列紊乱、心肌间质水肿、增生,小血管壁增厚、炎性细胞浸润。术后6个月,心肌纤维断裂、心肌胞浆玻璃样变性、颗粒状坏死、纤维化。4、免疫组织化学检测中,正常对照组和假手术组心肌组织没有染色,手术组在腹主动脉缩窄术后的3月之内,心肌细胞ERK1广泛阳性表达,胞浆呈棕褐色,在3月到6月期间阳性表达心肌数目逐渐减少,颜色变淡;在术后3月之内,少量心肌细胞表达p38MAPK,在3月到6月期间阳性表达心肌数量逐渐增多,颜色变深。5、正常大鼠血清中,未测出IgG1、IgG2亚类AMHCA。术后一周手术组达心衰入选标准大鼠12只,IgG2bAMHCA的阳性率较术前明显增高。术后假手术组大鼠未达心衰者18只,各亚类IgG AMHCA未检出。术后心衰大鼠IgG1动态改变不明显,IgG2a和IgG2b AMHCA阳性率动态改变有统计学差异,IgG1和IgG2b AMHCA阳性率最高时间段为50-90天;IgG2a阳性率最高时间段为150-180天。IgG1抗体滴度动态改变不明显,IgG2a和IgG2b AMHCA抗体滴度动态改变有统计学差异,IgG1和IgG2b抗体滴度最高时间段为50-90天左右;IgG2a抗体滴度最高时间段为150-180天。结论1、综合心脏超声、血流动力学指标、心肌病理及免疫组织化学结果判断,腹主动脉缩窄术后,前3个月为心衰心功能代偿期,到术后6个月进展为失代偿期。2、本实验中,心衰大鼠心脏超声入选标准:LVESD>0.55, LVEDD>0.6, EF<0.60, FS<0.25。3、心肌的肥大由代偿期发展到心力衰竭失代偿期,血流动力学发生改变,心肌功能受损,心肌间质纤维增生。血液中AMHCA亚类在这一转变过程中也发生了改变。各亚类IgG之间的类别转化受着T细胞的调节及微环境中不同细胞因子组合的影响。IgG2b的生成主要受Th2细胞的调控,Th2细胞分泌的细胞因子刺激B细胞等增殖和抗体生成,参与调节体液免疫;IgG2a则受Th1细胞的调控,Th1分泌的细胞因子主要参与细胞免疫。术后前3个月AMHCA亚类以IgG2b升高为主,3-6个月以IgG2a升高为主。提示心力衰竭的不同进程,免疫机制发生变化,心功能代偿期以体液免疫为主,心功能失代偿期以细胞免疫为主。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一：大鼠慢性心力衰竭模型的建立
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 实验二：抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体（AMHCA）亚类的血清水平的测定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢