本文主要研究内容
作者李亚平,种慧敏,袁梅,周伟,卢进鹏,胡小蕾,廖飞,杨晓兰（2019）在《芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较》一文中研究指出：目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。
Abstract
mu de bi jiao sui ji yin wu yu jing que yin wu PCRkuo zeng shi shi lu nong gan jun fang xiang liu suan zhi mei (Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)ding dian bao he tu bian de zheng ti xiao lv ji cheng ben ,yi jian li gao xiao shi yong de ding dian bao he tu bian fang an 。fang fa yi da chang gan jun jian xing lin suan mei (Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)yu PAASrong ge biao da zhi li wei mo ban ,fen bie yong zhen dui PAASmu de wei dian de sui ji yin wu 、jing que yin wu deng liang hun ge wu ji chan ge jing que yin wu ,jin hang quan zhi li PCRkuo zeng gou jian ding dian bao he tu bian ti ku ;jian lie jie xi bao hou gao tong liang ce ding PAAStu bian ti yu ECAPhuo xing bi zhi jin hang shai shua ,bi jiao 3chong ding dian bao he tu bian jian ku fang an xu shai shua de chan ke long shu liang 、suo huo tu bian ti chong lei 、zheng ti hao shi 、zheng ti cheng ben ji ying xiang yin su 。jie guo yong sui ji yin wu PCRdui M72wei ding dian bao he tu bian you ming xian mi ma zi pian hao xing ,shai shua chao 600ge chan ke long jin huo de 10chong yu ji tu bian ti ,dan dui G138wei ding dian bao he tu bian wei jian ming xian de mi ma zi pian hao xing ju shai shua bu dao 150ge chan ke long huo de 18chong yu ji tu bian ti ;jing que yin wu deng liang hun ge wu dui M72wei shi shi ding dian bao he tu bian ,shai shua bu chao guo 190ge ke long cheng gong huo de 19chong yu ji tu bian ti ;chan ge jing que yin wu dui M72wei zhu ge PCRshi shi ding dian bao he tu bian ,jin ge shai shua 2ge chan ke long jiu huo de 19chong yu ji tu bian ti 。chan ge jing que yin wu zhu ge PCRshi shi ding dian tu bian suo huo bao he tu bian ti ku wan zheng ,xu shai shua de chan ke long shu zui shao ,zong hao shi he zong cheng ben zui di ;xiang bi zhi xia ,yong sui ji yin wu he jing que yin wu deng liang hun ge wu shi shi ding dian bao he tu bian shi ,suo xu shai shua de chan ke long shu 、zheng ti hao shi ji cheng ben jun xian zhe zeng jia 。jie lun jie xi xu lie -huo xing guan ji shi ,yong chan ge jing que yin wu zhu ge PCRshi shi ding dian bao he tu bian you xian zhe zheng ti cheng ben he xiao lv you shi ;jin shai shua yang xing tu bian ti shi ,yong jing que yin wu deng liang hun ge wu jin hang PCRjian ku zai cheng ben he xiao lv shang geng you you shi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西安交通大学学报(医学版)的李亚平,种慧敏,袁梅,周伟,卢进鹏,胡小蕾,廖飞,杨晓兰，发表于刊物西安交通大学学报(医学版)2019年03期论文，是一篇关于芳香硫酸酯酶论文,定点饱和突变论文,随机引物论文,精确引物等量混合物论文,单个精确引物论文,西安交通大学学报(医学版)2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西安交通大学学报(医学版)2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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