脾虚与皮肤机械屏障功能关系的部分实验研究

论文摘要

目的建立脾虚复合皮肤机械屏障功能障碍瘙痒小鼠模型,观察小鼠瘙痒行为、表皮神经酰胺含量和表皮厚度的变化,以及中药复方黄连解毒汤、参苓白术散对其的影响作用,为进一步从中医临床的证治规律出发,探讨健脾方药与特应性皮炎之间的相关性、脾虚与皮肤机械屏障功能障碍之间的关系提供实验依据,并为研究脾虚本质提供新的研究思路和方法。方法1.小鼠表皮脂质的抽提及表皮中神经酰胺含量测定方法研究抽提动物表皮脂质,采用薄层层析、BIO-RAD GelDoc凝胶成像系统采集图像、Quantity One软件分析测定神经酰胺含量,并对含量测定方法进行了方法学考察。2.皮肤机械屏障功能障碍瘙痒小鼠模型的考察用有机溶剂造成小鼠瘙痒模型,考察造模0天、3天、5天、7天小鼠瘙痒行为及表皮神经酰胺含量,以确定造模天数。3.黄连解毒汤对脾虚小鼠皮肤机械屏障功能障碍瘙痒的作用分别复制大黄、利血平所致小鼠脾虚模型,并在此基础上复制小鼠皮肤机械屏障功能障碍瘙痒模型,给予黄连解毒汤水煎液,记录动物两小时内瘙痒次数,测定神经酰胺含量,测量表皮厚度。4.黄连解毒汤对小鼠皮肤机械屏障功能的影响及参苓白术散对其的干预作用采用黄连解毒汤水煎液给予小鼠灌胃,并在此基础上复制小鼠皮肤机械屏障功能障碍瘙痒模型,再给予参苓白术散水煎液治疗,记录动物两小时内瘙痒次数,测定神经酰胺含量,测量表皮厚度。结果1.小鼠表皮脂质的抽提及表皮中神经酰胺含量测定方法研究方法学考察,得出:神经酰胺在0.416～2.08μg范围内,含量与密度积分值有良好线性关系,相关系数R=0.9953;同板精密度良好,RSD=1.09%;异板精密度良好,RSD=2.10%;对照品溶液与供试品溶液在2小时内显色稳定;重现性良好,RSD=3.03%;平均加样回收率为99.58%,RSD=1.46%;样品测定结果RSD=3.10%。2.皮肤机械屏障功能障碍瘙痒小鼠模型的考察造模5天动物与空白组动物比较,瘙痒行为最为明显,P＜0.001;表皮神经酰胺含量降低最为明显,P＜0.001。3.黄连解毒汤对脾虚小鼠皮肤机械屏障功能障碍瘙痒的影响作用（1）瘙痒行为与正常组动物比较,单纯瘙痒组动物瘙痒次数明显增加（P＜0.01）;两种脾虚瘙痒组动物瘙痒次数少于单纯瘙痒组动物,利血平模型组P＜0.05;各给药组（黄连解毒汤）动物瘙痒次数均值小于相应脾虚组动物瘙痒次数均值。（2）神经酰胺含量①大黄所致脾虚,各组均值:空白组＞瘙痒组＞大黄组＞给药组,瘙痒组与空白组比较,P＜0.001,大黄组与瘙痒组、给药组与大黄组比较,P＜0.05。②利血平所致脾虚,各组均值:空白组＞瘙痒组＞利血平组＞给药组,瘙痒组与空白组、利血平组与瘙痒组比较,P＜0.001;给药组与利血平组比较,神经酰胺含量没有提高。（3）表皮厚度复制皮肤机械屏障功能障碍瘙痒模型后,与空白组比较,瘙痒组表皮明显增厚（P＜0.001）。大黄和利血平所致的脾虚也能够使表皮增厚,与空白组比较P＜0.05;与瘙痒组比较,大黄脾虚模型组轻度增厚。给药组动物表皮厚度略小于相应脾虚模型组,两组间比较,没有统计学意义。4.黄连解毒汤对小鼠皮肤机械屏障功能的影响及参苓白术散对其的干预作用（1）瘙痒行为单纯瘙痒组动物瘙痒次数明显增加,与正常组动物比较,P＜0.01;采用黄连解毒汤复制脾虚模型后,黄连解毒汤模型组动物瘙痒次数少于单纯瘙痒组动物（P＜0.05）,给药组（参苓白术散）与黄连解毒汤模型组动物比较瘙痒次数减少（P＜0..05）。（2）神经酰胺含量各组均值:空白组＞瘙痒组＞给药组（参苓白术散）＞黄连解毒汤组,瘙痒组与空白组比较,P＜0.01,给药组（参苓白术散）与黄连解毒汤组比较,P＜0.05。（3）表皮厚度复制皮肤机械屏障功能障碍瘙痒模型后,单纯瘙痒组动物表皮增厚,与空白组比较,P＜0.001。黄连解毒汤能够加剧此种表皮增厚,黄连解毒汤模型组与瘙痒组比较,P＜0.05;参苓白术散可明显抑制此种表皮增厚,给药组动物表皮厚度明显低于黄连解毒汤模型组,P＜0.001。结论本次实验采用表皮神经酰胺含量测定、瘙痒行为观察、表皮厚度测量等作为检测指标,复制了皮肤机械屏障功能障碍瘙痒模型,与空白组比较,动物瘙痒行为明显、表皮神经酰胺含量下降,表皮增厚,说明皮肤机械屏障功能被破坏时表皮神经酰胺含量降低,而脾虚又会进一步降低表皮的神经酰胺含量,导致皮肤机械屏障功能障碍程度加重。在单纯瘙痒模型动物的基础上,利血平、大黄、黄连解毒汤三种方法所致脾虚模型小鼠的表皮神经酰胺含量降低,皮肤机械屏障功能进一步下降。健脾方药参苓白术散能够在一定程度上改善之。脾虚与皮肤机械屏障功能障碍之间有一定关联,在特应性皮炎的治疗中,健脾方药可能对于异位性皮炎患者皮肤屏障功能的修复发挥了重要的作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 实验研究
• 实验一 小鼠表皮脂质的抽提及表皮中神经酰胺含量测定方法研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验仪器
• 1.3 药品与试剂
• 1.4 其他材料
• 2 实验方法
• 2.1 小鼠表皮脂质的抽提
• 2.2 表皮中神经酰胺含量测定
• 3 实验结果
• 实验二 皮肤机械屏障功能障碍瘙痒小鼠模型的考察
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 2.1 造模方法
• 2.2 动物分组
• 2.3 指标的观察与测定
• 2.4 统计方法
• 3 实验结果
• 实验三 黄连解毒汤对脾虚模型小鼠皮肤机械屏障功能的作用
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 2.1 大黄致小鼠脾虚对小鼠皮肤机械屏障功能的影响及黄连解毒汤对其的作用
• 2.1.1 动物分组与给药
• 2.1.2 观察指标
• 2.1.3 统计方法
• 2.1.4 实验结果
• 2.2 利血平致小鼠脾虚对小鼠皮肤机械屏障功能的影响及黄连解毒汤对其的作用
• 2.2.1 动物分组与给药
• 2.2.2 观察指标
• 2.2.3 统计方法
• 2.2.4 实验结果
• 3 实验小结
• 实验四 黄连解毒汤对小鼠皮肤机械屏障功能的影响及参苓白术散对其的干预作用
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 实验小结
• 讨论
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 后置部分