论文摘要
目的:建立大鼠激素性股骨头缺血性坏死模型,观察桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死大鼠转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）表达的影响,探讨桃红四物汤防治激素性股骨头坏死的作用机制,进一步为活血化瘀法防治激素性股骨头缺血性坏死和临床推广应用提供理论依据。方法:采用清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体重200±20g,首先随机分为两组:空白组4只和模型组36只,模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24.5mg/kg,经6周诱导出激素性股骨头缺血性坏死的早期模型;空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水。6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功;随后将其余32只模型组大鼠随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服中药和生理盐水,于灌胃后第6、8周时期在麻醉下,腹主动脉取血,化学比色法检测血清中碱性磷酸酶、Elisa（酶联免疫吸附法）检测血清中TGF-β1的含量;应用RT-PCR（反转录-聚合酶链反应）技术检测股骨头局部TGF-β1mRNA的转录,免疫组化法检测股骨头局部微血管密度和股骨头局部TGF-β1的表达。结果:1、大体观察:短期内大剂量使用激素使模型组动物体重一直下降,灌胃后,治疗组动物体重较对照组体重回升显著（P＜0.05）。2、组织病理学观察:激素可使模型组空缺骨陷窝数明显增多,骨小梁细疏,髓腔脂肪细胞增大、增多,与空白组有明显差异（P＜0.01）。3、电镜观察:模型组骨细胞数量减少,退变固缩或出现出现脂滴,成骨细胞减少,髓内脂肪细胞增大、增多,空白组骨细胞富含粗面內质网,多聚核糖体多,线粒体发达,嵴结构清晰,核异染色质丰富,核仁可见。4、股骨头局部血管微密度:治疗组股骨头局部血管微密度逐渐增高,对照组股骨头局部微血管密度较治疗组明显减低,两组相比有明显差异（P＜0.01）。5、免疫组化检测TGF-β1的表达,图像分析仪分析:治疗组股骨头局部TGF-β1较对照组表达明显增强,两组有明显差异（P＜0.01）。6、血清中碱性磷酸酶含量检测:对照组血清中碱性磷酸酶含量增高,与对照组相比,两组有显著差异（P＜0.01）。7、血清中TGF-β1含量检测:治疗组血清中TGF-β1的表达增强,与对照组相比有明显差异（P＜0.01）。8、股骨头局部TGF-β1mRNA的转录:治疗组在第6周时表达即增强,在第8周时表达又降低,而对照组在第6周时表达减少,在第8周时未检测到TGF-β1mRNA的表达,两组差异显著（P＜0.05,P＜0.01）。TGF-β1mRNA与血清和股骨头局部IGF-β1的表达具有一致性。结论:1、大鼠腹腔醋酸泼尼松龙注射加间断立位股骨头缺血性坏死造模稳定,重复性好。2、桃红四物汤能通过促进激素性股骨头缺血性坏死大鼠模型股骨头局部TGF-β1mRNA的转录水平,促进股骨头局部TGF-β1表达。3、桃红四物汤能通过促进激素性股骨头缺血性坏死大鼠模型TGF-β1的表达,从而可以有效促进股骨头局部微血管的再生。4、桃红四物汤能对抗激素的作用,拮抗激素引起的骨质破坏,降低血清中ALP的含量。
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