论文题目: 羟基喜树碱诱导人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡及机理的研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 临床检验诊断学
作者: 薛萌
导师: 陈宝安
关键词: 骨髓增生异常综合征,羟基喜树碱,凋亡,细胞周期,生存素,流式细胞仪技术,逆转录聚合酶链反应
文献来源: 东南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的研究羟基喜树碱(HCPT)对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞的凋亡诱导作用,探讨药物诱导凋亡的可能机制,并可为临床MDS的治疗提供一定的理论依据。方法采用MTT法研究HCPT对MUTZ-1细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪技术分析凋亡细胞量和细胞周期的改变;光镜及透射电镜观察凋亡细胞形态学改变;半定量RT-PCR方法检测生存素基因(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2相关X蛋白基因(Bax)的mRNA表达水平。结果1 HCPT可抑制MUTZ-1细胞的生长,不同浓度药物处理对细胞生长的抑制作用之间差别有统计学意义(F=10.24,p<0.0001);药物处理不同时间对细胞生长的抑制作用之间差别有统计学意义(F=3.78,p=0.009)。2 HCPT可诱导MUTZ-1细胞株凋亡,不同浓度药物处理后,细胞凋亡率之间差别有统计学意义(F=16.35,p<0.0001);药物处理不同时间后,细胞凋亡率之间差别有统计学意义(F=57.93,p<0.0001)。3光镜观察可见凋亡细胞胞体固缩,核固缩,核染色质碎裂。透射电镜观察,可见凋亡细胞核染色质凝聚、边集,部分细胞核膜消失;细胞浆浓缩、密度增加,胞浆内可见大小不规则的染色质团块。4不同浓度HCPT处理24 h,与空白对照组比较,S期细胞增多,细胞阻滞于S期(p<0.05)。5在一定条件下,HCPT处理细胞不同时间后,Bcl-2、Bax基因表达量未见明显变化(p>0.05),Survivin基因表达量可见明显下调(p<0.05);在一定条件下,不同浓度HCPT处理细胞后,Bcl-2、Bax基因表达量未见明显变化(p>0.05),Survivin基因表达量可见下调趋势(p<0.05)。结论HCPT抑制MUTZ-1细胞的生长,呈剂量和时间的依赖性。HCPT可诱导MUTZ-1细胞凋亡,呈剂量和时间依赖性。光镜及透射电镜下可见典型凋亡细胞。HCPT诱导MUTZ-1细胞凋亡过程中可改变细胞周期,使细胞阻滞于S期。HCPT诱导MUTZ-1细胞凋亡过程中,可能与抗凋亡基因Survivin表达下调有关。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前 言
文献综述
一 细胞凋亡与 MDS
1 凋亡调节基因的异常
2 骨髓基质细胞分泌抑制性细胞因子表达异常
3 Fas-FasL 表达异常
4 凋亡酶 Caspase 的改变
二 MDS 的治疗现状
三 羟基喜树碱的研究现状
1 羟基喜树碱的结构
2 羟基喜树碱的作用机理
3 羟基喜树碱的临床应用
四 展望
材料与方法
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要器材
1.3 主要试剂
1.4 溶液配制
2 方法
2.1 细胞株的培养
2.2 细胞计数
2.3 MTT 法检测细胞生长抑制率
2.4 流式细胞仪技术测定细胞凋亡率
2.5 流式细胞仪技术分析细胞周期
2.6 透射电镜标本的制备
2.7 光镜标本的制备
2.8 RNA 的提取
2.9 RNA 纯度和浓度测定
2.10 RNA 完整性鉴定
2.11 逆转录
2.12 PCR 引物
2.13 半定量 PCR
2.14 PCR 产物电泳分析
2.15 PCR 产物图像分析
2.16 统计学方法
结 果
1 MTT 法检测 HCPT 对人 MDS 细胞株 MUTZ-1 细胞生长的抑制作用
2 流式细胞仪技术测定 HCPT 诱导 MUTZ-1 细胞的凋亡细胞量
3 流式细胞仪技术测定 HCPT 对人 MDS 细胞株 MUTZ-1 细胞周期的影响:
4 HCPT 诱导人 MDS 细胞株 MUTZ-1 细胞凋亡的形态学改变
4.1 光镜观察 MUTZ-1 细胞凋亡的形态学改变
4.2 透射电镜观察 MUTZ-1 细胞凋亡的形态学改变
5 HCPT 处理人 MDS 细胞株 MUTZ-1 细胞,对凋亡调节基因的影响
讨 论
一 MDS 与“凋亡治疗”
二 羟基喜树碱的作用机制
三 HCPT 对人 MDS 细胞株 MUTZ-1 细胞凋亡诱导作用的实验研究
1 HCPT 对 MUTZ-1 细胞生长的抑制作用
2 HCPT 诱导 MUTZ-1 细胞的凋亡
2.1 流式细胞仪技术检测 HCPT 诱导 MUTZ-1 细胞的凋亡细胞量
2.2 HCPT 处理后 MUTZ-1 细胞形态学的观察
3 流式细胞仪技术检测 HCPT 对 MUTZ-1 细胞周期的影响
4 HCPT 诱导 MUTZ-1 细胞凋亡过程中,对凋亡调节基因表达的影响
5 小结
结 论
参考文献
致 谢
作者简介
发布时间: 2007-06-11
参考文献
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