黄芩苷对CEM白血病细胞株增殖、凋亡的影响及其机制的初步研究

论文摘要

目的①研究中药黄芩苷（Baicalin）对人T淋巴细胞白血病细胞株CEM细胞增殖、凋亡的影响。②观察黄芩苷对CEM细胞增殖、凋亡相关基因及蛋白表达水平的影响,探讨其作用机制。③观察黄芩苷对CEM细胞作用后PI3-K/Akt信号转导通路中蛋白表达的变化。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线、细胞克隆形成实验观察黄芩苷对CEM细胞增殖的影响; Annexin V/PI双染流式细胞检测、AO-EB荧光染色及DNA片段化分析检测黄芩苷对CEM细胞凋亡的影响;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc、bcl-2、bax基因mRNA表达水平的变化,蛋白印迹法（Western-Blot）检测c-myc、bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP蛋白以及PI3-K/Akt信号转导通路中蛋白表达水平的变化。结果（1）细胞生长曲线及克隆形成实验结果显示黄芩苷能明显抑制CEM细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为30μM; DNA片段化、AO-EB荧光染色凋亡细胞的检出及Annexin V/PI双染流式细胞检测等证实黄芩苷能有效诱导CEM细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内与药物作用浓度和作用时间呈正相关。（2）80μM黄芩苷作用24h、48h、72h后,CEM细胞c-myc、bcl-2基因mRNA表达随着作用时间的延长而逐渐减少;也下调了c-myc、bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP蛋白的表达;bax基因mRNA表达则随着作用时间的延长而逐渐增强。（3）80μM黄芩苷作用24h、48h、72h后,下调CEM细胞Akt信号通路中蛋白p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR、p-GSK-3β及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路中的相关蛋白MAPK、p-MAPK的表达;而Akt、GSK-3β的表达无明显变化。结论（1）黄芩苷能有效抑制CEM细胞增殖,诱导其凋亡,在一定浓度范围内呈剂量时间效应关系;可能是通过下调c-myc、bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-9 mRNA和/或蛋白的表达及上调bax的表达起作用。（2） Akt信号通路参与了黄芩苷抑制CEM细胞增殖、诱导凋亡的过程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 黄芩苷抑制CEM 细胞增殖及诱导凋亡的作用
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 第二部分 黄芩苷抑制CEM 细胞增殖及诱导凋亡的机制探讨
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三部分 黄芩苷对 CEM 细胞 PI3-K/Akt 信号转导途径相关信号分子的作用
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述