21三体综合征21qCpG岛DNA甲基化水平研究

论文摘要

实验目的:21三体综合征是由于21号染色体不分离所导致的一种染色体病,表现为严重的智力发育障碍和多发性先天畸形,是临床最常见的严重出生缺陷之一,由于该病缺乏有效的治疗手段,给社会、家庭带来异常沉重的负担,因而进行孕早期筛查和产前染色体诊断是降低其发生率的有效途径。但目前仍未见21三体患者CpG岛DNA甲基化状态的相关报道,因此,研究21三体患者CpG岛甲基化状态,这对探索更有效、更特异的用于21三体产前风险评估的表观遗传学分子靶点具有重要的科学意义和临床实践价值。实验方法:运用HpaII–McrBC PCR（HM-PCR）方法筛检分析21qCpG岛甲基化状态。首先从UCSC数据库获得21qCpG岛DNA序列,并与华大基因炎黄数据库比对,验证序列和引物。然后建立HM-PCR检测方法,并利用HM—PCR技术筛查和分析了150例21三体患者21q上2690个CpG岛,并将患者CpG岛甲基化状态与正常个体进行比较。实验结果:本研究首先验证了149个CpG岛的DNA序列和148对CpG岛引物的准确性,明确序列和引物在中国汉族人群运用的可行性。建立了简化的HM—PCR方法。HM—PCR筛查发现21三体患者21号染色体长臂的CpG岛中, 98个无甲基化,30个完全甲基化,12个杂合甲基化,8个不完全甲基化,在健康个体21号染色体长臂的148个CpG岛中也得到完全相同结果。有4个杂合甲基化CpG岛（编号:11,15,27,71）与日本人存在差异,日本人群呈现出无甲基化状态;有1个杂合甲基化CpG岛（编号:93）与日本人不一致,日本人群呈现出完全甲基化状态。这种差异是否是种族之间的差异,尚需对这5个CpG岛进行重亚硫酸盐测序确认。第103号CpG岛没有HpaII和HhaI酶切位点,因此,需要利用重亚硫酸盐测序检测。实验结论:21三体患者与健康个体之间在21qCpG岛上不存在DNA甲基化状态的差异;21qCpG岛DNA甲基化状态在同一种族内高度一致,那么21qCpG岛DNA甲基化状态可否为种族间识别的表观遗传学标记,尚需重亚硫酸盐测序法予以证实。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 21qCpG 岛DNA 序列的获得与数据库比对
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 第二部分 21 三体综合征21q CpG 岛甲基化水平研究
• 第一章 HpaⅡ–McrBC PCR（HM-PCR）方法建立
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 第二章 21 三体患者21q CpG 岛甲基化水平研究
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述：DNA 甲基化的种族差异性
• 参考文献
• 致谢
• 攻读博士学位期间发表的学术论文