聚焦超声阻断宫颈高危型HPV感染的机制与初步临床研究

论文摘要

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。高危型人乳头状瘤病毒（High Risk Human papiloman virus,HR-HPV）持续感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生的始动因素。阻断HR-HPV的持续感染是防治宫颈癌的重要途径。但目前对于宫颈HR-HPV的持续感染尚没有有效的治疗方法。聚焦超声作为治疗宫颈疾病的新技术,其抑制HR-HPV持续感染的作用已经得到初步证实,本课题拟通过研究聚焦超声对宫颈癌Caski细胞存活率和细胞形态的影响,以及对Caski细胞中HPVE6、E7基因表达的影响,探讨聚焦超声阻断宫颈HPV感染的机制,并通过临床对照研究,进一步探讨聚焦超声用于治疗宫颈HR-HPV持续感染的有效性。一聚焦超声对宫颈癌Caski细胞存活率和细胞形态的影响采用聚焦超声（辐照参数:10.2MHz,3.5W,焦距4mm）辐照宫颈癌Caski细胞,辐照时间分别为10、20、30、40、50 S。并以未辐照的Caski细胞作为对照组,辐照后于孵育箱内孵育24小时,显微镜下观察各组细胞形态采用四甲基偶氮噻唑蓝（Methyl ThazolylTetrazolium,MTT）检测其吸光度,观察聚焦超声辐照不同时间后对细胞存活率的影响。结果:⑴聚焦超声以不同的时间辐照宫颈癌Caski细胞,培养24小时后,光镜下观察显示随着辐照时间的延长,长梭型的Caski细胞增大、变圆,逐渐失去正常形态,同时细胞核增大,核质明显。⑵MTT法检测结果显示:聚焦超声辐照30S,24小时后细胞存活率为55.7%。辐照50S,24小时后细胞存活率为26.1%。随着辐照时间的延长,24小时后细胞存活率逐渐减低,且其差异有统计学意义（P<0.05）。结论:聚焦超声辐照宫颈癌Caski细胞时,辐照时间越长,细胞形态失常越显著,细胞存活率越低。二聚焦超声对宫颈癌Caski细胞中HPV16E6、E7基因表达的影响。聚焦超声辐照Caski细胞,时间分别为30S、50S,并以未辐照组作为对照。各组细胞于温箱内孵育24小时后,Trizol试剂盒提取各组细胞中的rna,用逆转录聚合酶链反应（Reversetrans-cription-Po lymerase-Chain-Reaction,RT-PCR）半定量检测聚焦超声对HPV16 E6、E7基因表达的影响。PCR产物分析:扩增产物于1%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察并照相,密度扫描分析仪测定光密度（optical density,OD）值。结果:聚焦超声辐照30秒后,Caski细胞中HPVE6、E7基因表达较对照组低,辐照50秒后其表达低于30秒。其条带与内参条带的积分光密度比值差异有显著的统计学意义（P<0.05）结论:聚焦超声辐照后Caski细胞内HPV病毒中E6、E7基因表达减弱,其表达与辐照时间成负相关。三聚焦超声治疗高危型宫颈HPV持续感染的初步临床研究将临床确诊的宫颈高危型HPV持续感染患者90例,随机分为3组（每组30例）,分别给与聚焦超声治疗、干扰素治疗及假辐照处理,于治疗后3个月,6个月采用二代杂交捕获试验（Hybrid Capture 2,HC2）检测各组的HPV的转阴率,缓解率及无效率。结果:治疗后3个月,聚焦超声治疗组转阴率为53.3%;干扰素治疗组转阴率48.3%。假照组转阴率为31.0%（P<0.05）。治疗后6个月,聚焦超声治疗组转阴率为82.8%,干扰素治疗组转阴率79.3%,对照组转阴率53.6%,与假照组对比,聚焦超声及干扰素均能显著降低宫颈高危型HPV感染患者的HPVDNA滴度（P<0.05）,聚焦超声与干扰素组疗效之间无显著差异（P>0.05）。结论:聚焦超声能有效控制宫颈持续性高危型HPV感染

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 聚焦超声对宫颈癌Caski细胞存活率和细胞形态的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 第二部分 聚焦超声对宫颈癌Caski细胞中HPV16E6、 E7 基因表达的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 第三部分 聚焦超声抑制宫颈高危型HPV 感染的初步临床研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 全文总结
• 附图
• 文献综述
• 致 谢
• 攻读硕士学位期间所发表的文章