高迁移率族蛋白B1在动脉粥样硬化中的作用及辛伐他汀干预研究

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种慢性炎症性疾病。高迁移率族蛋白B1（high mobility group box B1,HMGB1）,作为一个重要的炎症介质,亦参与了AS的慢性炎症进程；而其重要的受体之一,晚期糖基化末端产物受体（receptor for advanced glycation end products,RAGE）也促进了动脉粥样硬化的形成与发展。最新研究表明,给予ApoE-/-小鼠HMGB1中和抗体或可溶性晚期糖（?）化末端事物受体（soluble RAGE,sRAGE）干预可明显抑制其AS,且内皮细胞中RAGE通路的活化在AS过程中起了重要作用。已发现,他汀可抑制血管RAGE,升高2型糖尿病人血清sRAGE水平。但他汀是否通过羟甲基戊酸途径抑制HMGB1-RAGE轴而进一步抑制AS,仍尚不清楚。故本研究采用ApoE-/-小鼠经高脂喂养建立早期AS模型,并分别给予安慰剂、辛伐他汀及辛伐他汀+羟甲基戊酸干预。结果发现持续6周高脂喂养后,动脉粥样硬化斑块明显；辛伐他汀在未改变其血脂水平的情况下,明显抑制了早期斑块的形成,并抑制了血管中HMGB1、RAGE及HMGB1-RAGE轴下游调控分子。此外,辛伐他汀升高了血清sRAGE水平,且血清sRAGE水平与主动脉根部斑块面积成负相关。羟甲基戊酸可完全阻断辛伐他汀的上述作用。由此,说明辛伐他汀抑制了ApoE-/-小鼠血管中HMGB1-RAGE轴,并明显降低了其动脉粥样硬化程度,且上述作用均与羟甲基戊酸途径相关。另外还采用HMGB1刺激人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）,发现可诱导HUVEC中HMGB1-RAGE轴的活化：内皮细胞中HMGB1、RAGE及血管细胞黏附分子1（vascular cellular adhesion molecule 1,VCAM1）表达增高；而辛伐他汀或RAGE中和抗体预干预后明显抑制了HMGB1的上述作用,且两者无明显差异。即进一步说明了辛伐他汀可抑制内皮细胞中HMGB1-RAGE轴的活化。综上所述,可推测辛伐他汀通过羟甲基戊酸途径抑制了ApoE-/-小鼠HMGB1-RAGE轴的活化及AS程度,且其抑制动脉粥样硬化的作用可能与内皮细胞中HMGB1-RAGE轴的抑制有关,此仍有待进一步研究。第一部分HMGB1在ApoE-/-（?）、鼠动脉粥样硬化中的作用及辛伐他汀干预研究目的：研究辛伐他汀对ApoE-/-小鼠HMGB1-RAGE轴及动脉粥样硬化的影响。方法：18只5周龄ApoE-/-小鼠予以高脂喂养,8周龄时随机分为3组：对照组（安慰剂）,辛伐他汀（50mg/kg/day）组,辛伐他汀（50mg/kg/day）+羟甲基戊酸（30 mg/kg/day）组。11周龄取材,进行主动脉根部斑块染色,血管内炎症分子（HMGB1、RAGE、VCAM1,MCP1,TF）Western-blot检测,及血清HMGB1、sRAGE水平ELISA检测。同时还进行了主动脉弓部内膜扫描电镜观察及斑块内HMGBl.巨噬细胞量的免疫荧光检测。结果：与对照组相比,辛伐他汀明显降低了ApoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积,抑制了血管内HMGB1、RAGE、VCAM1,MCP1,TF蛋白表达水平；并升高了血清sRAGE水平,且其与血清HMGB1水平及主动脉根部斑块面积均成负相关,而对血清HMGB1水平有降低趋势但无统计学意义。此外,辛伐他汀亦明显减少了主动脉弓部内膜上炎症细胞的粘附及斑块HMGB1与内巨噬细胞量。而羟甲基戊酸完全阻断了辛伐他汀的上述作用,与对照组无显著差异。结论：辛伐他汀通过羟甲基戊酸途径抑制了ApoE-/-（?）、鼠中HMGB1-RAGE轴及动脉粥样硬化。第二部分HMGB1诱导人脐静脉内皮细胞HMGB1-RAGE通路活化及辛伐他汀干预研究目的：研究辛伐他汀对HMGB1诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中HMGB1-RAGE轴活化的影响。方法：人脐静脉内皮细胞被分为以下5个处理组：对照组,HMGB1（100ng/ml）处理组,anti-RAGE抗体（4ug/ml）+ HMGB1（100ng/ml）处理组,anti-RAGE抗体（12ug/ml）+ HMGB1（100ng/ml）处理组,辛伐他汀（10-5M）+ HMGB1（100ng/ml）处理组。24小时后,提取蛋白进行CAM1、HMGB1及RAGE的Western-blot检测。结果：对照组相比,HMGB1明显增高了细胞内VCAM1、HMGB1及AGE的蛋白水平；而辛伐他汀明显抑制了HMGB1诱导的HUVEC的VCAM1、HMGB1及RAGE的变化,且其与anti-RAGE抗体的作用相似。结论：辛伐他汀抑制HMGB1诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中HMGB1-RAGE轴活化,且RAGE在其中起了关键作用。

论文目录

• 英文缩写索引
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 HMGB1在ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中的作用及辛伐他汀干预研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 HMGBl诱导人脐静脉内皮细胞HMGB1-RAGE通路活化及辛伐他汀干预研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢