SLE患者外周血T淋巴细胞IL-13Rα1基因表达及其调节序列甲基化状态的研究

SLE患者外周血T淋巴细胞IL-13Rα1基因表达及其调节序列甲基化状态的研究

论文摘要

目的:(1)研究SLE患者外周血T淋巴细胞IL-13Ra1基因mRNA的表达(2)研究SLE患者外周血T淋巴细胞IL-13Ra1基因调节序列甲基化状态方法:(1)密度梯度离心分离正常人、病人的外周血单个核细胞,磁珠分离CD4+和CD8+T细胞(2) Trizol提取RNA、DNA(3)实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR)检测IL-13Ra1 mRNA的表达(4)用亚硫酸氢钠处理DNA,甲基化特异性PCR(MSP)检测IL-13Ra1基因调节序列的甲基化水平结果:(1) SLE患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞IL-13Ra1mRNA表达较正常人增高,差异具有显著性(P<0.05)。(2) SLE患者外周血CD4+T细胞IL-13Ra1基因调节序列处于低甲基化水平,与正常组比较有显著性差异(P<0.05)。(3) SLE患者外周血CD4+,CD8+T细胞IL-13Ra1mRNA的表达与疾病活动度(SLEDAI评分)呈正相关(r=0.789,p=0.007;r=0.760,p=0.02);SLE患者CD4+T细胞的IL-13Ra1基因的甲基化水平与疾病活动度(SLEDAI评分)呈负相关(r=-0.886,p=0.003);CD4+T细胞IL-13Ra1mRNA表达与其调节序列的甲基化水平呈负相关(r=-0.836,p=0.01)。结论:SLE发病可能与DNA低甲基化导致SLE患者T细胞过度表达IL-13Ra1有关。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 仪器与设备与试剂
  • 2.1.1 主要仪器设备
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.2 研究对象
  • 2.3 实验步骤
  • 2.3.1 PBMC分离
  • 2.3.2 磁珠分离CD4+,CD8+ T细胞
  • 2.3.3 一步法提取RNA、DNA
  • 2.3.4 实时荧光定量PCR测定T淋巴细胞IL-13Ra1 mRNA表达
  • 2.3.5 MSP检测T淋巴细胞IL-13Ra1基因调节序列的甲基化水平
  • 2.4 统计学方法
  • 第三章 结果
  • 3.1 IL-13Rα1 mRNA表达水平
  • 3.2 CD4+、CD8+T淋巴细胞IL-13Rα1基因调节序列甲基化水平
  • 3.3 相关性分析
  • 第四章 讨论
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 致谢
  • 相关论文文献

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