马兜铃酸诱导小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究

论文摘要

马兜铃酸存在于65种以上的马兜铃科植物中,其中有许多曾用于传统中药、食品补充剂或草药疗法减肥。近年来,人们发现马兜铃酸是一种对人和动物都有致突变性的强致癌剂。在之前的研究中,我们发现马兜铃酸是一种强致突变剂,对小鼠淋巴瘤细胞有显著的细胞毒性和致突变作用。本研究中我们进一步阐明马兜铃酸（Aristolochic Acid, AA）的致突变分子机制,本试验采用“小鼠淋巴瘤细胞L5178Y/TK+/-致突变检测方法”（L5178Y/TK+/- Mouse Lymphoma Mutation Assay,MLA）来获得胸苷激酶基因（tk）突变克隆。为了检测含功能性tk基因的11号染色体（11b）上DNA断裂情况,我们挑取对照组和100μg/ml AA处理小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2-细胞得到的tk基因突变克隆,提取DNA,用基于PCR的杂合性缺失（Loss of heterozygosity,LOH）的分析方法考察11号染色体上分布的tk位点和其他三个微卫星位点（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）的杂合性缺失情况。从检测结果来看100μg/ml AA诱导的突变体中功能性tk基因缺失率为

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 中药安全性评价的研究背景
• 1.2 中药毒性的认识
• 1.2.1 中药的毒性成分
• 1.2.2 中药致突变性的研究
• 1.3 马兜铃酸相关研究进展简介
• 1.3.1 马兜铃酸的基本性质
• 1.3.2 马兜铃酸药理及临床
• 1.3.3 马兜铃酸毒性作用
• 1.4 遗传毒理学介绍
• 1.4.1 遗传毒理学的产生和发展
• 1.4.2 遗传毒理学研究内容
• 1.4.3 常用遗传毒性检测方法和发展趋势
• 1.5 胸苷激酶（tk）基因体外突变试验介绍
• 1.5.1 tk 基因突变试验常用的细胞株
• 1.5.2 tk 基因突变试验原理
• 1.5.3 小鼠淋巴瘤细胞试验概要
• 1.6 tk 基因突变试验分子机制的研究
• 1.6.1 tk 基因杂合性缺失（LOH）分析
• 1.7 小结
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器与耗材
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 小鼠淋巴瘤细胞突变试验步骤
• 2.2.3 杂合性缺失分析实验步骤
• 第三章 实验结果
• 3.1 马兜铃酸I 的细胞毒性分析
• 3.2 马兜铃酸I 的遗传毒性分析
• 3.2.1 细胞突变频率的分析
• 3.2.2 Tk1 位点杂合性缺失分析
• 3.2.3 考察116 染色体的断裂情况
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 缩略语
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录