论文摘要
目的：通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立H2O2心肌细胞氧应激损伤模型，观察脂联素对氧应激所致心肌细胞损伤的影响，并探讨其可能作用机制。方法：采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞，倒置相差显微镜下观察细胞牛长状态，通过α肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定。选用原代培养的3-4天的心肌细胞随机分为五组：①正常对照组：不加干预措施心肌细胞正常培养；②过氧化氢（H2O2）组：培养液中加入终浓度为200μmol／L的H2O2培养2小时；③脂联素+H2O2组：培养液中加入终浓度为30μg／mL的脂联素与心肌细胞共同孵育18小时，再在培养液中加入终浓度为200μmol／L的H2O2培养2小时；④脂联素+AraA（AMPK途径抑制剂）+H2O2组：培养液中加入终浓度为30μg／mL的脂联素和终浓度为1mmol／L的AraA与心肌细胞共同孵育18小时再加入终浓度为200μmol／L的H2O2培养2小时；⑤AraA+H2O2组：培养液中加入终浓度为1mmol／L的AraA与心肌细胞共同孵育18小时再加入终浓度为200μmol／L的H2O2培养2小时。实验终止后，在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化，使用透射电镜观察细胞的超微结构，采用化学比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）的释放，用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛（MDA）含量，用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性，通过琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡。结果：（1）细胞鉴定：荧光显微镜下可见细胞胞浆内均呈现绿色荧光，即胞浆内表达α-肌动蛋白，符合心肌细胞特征。（2）各组心肌细胞形态学比较：H2O2组细胞生长状态较差，电镜下可见心肌细胞颗粒变性、坏死，肌丝溶解，走行紊乱，线粒体高度肿胀，出现空泡变性；而脂联素+H2O2组：心肌细胞轻度水肿，无明显出血灶及颗粒变性，核周肌丝走行略紊乱，线粒体兀明显肿胀。（3）心肌细胞LDH释放量的变化：H2O2组心肌细胞LDH释放量较空白对照组有所增加（1712±218 vs 428±84，p<0．05）；脂联素+H2O2组LDH的释放量较H2O2组下降（830±111 vs1712±218，p<0．05）；而脂联素+AraA+H2O2组与脂联素+H2O2组相比LDH的释放量有所增加（1546±162 vs 830±111，p<0．05），与H2O2组比较下降，差异有统计学意义，p<0．05；AraA+H2O2组与H2O2组比较差异无统计学意义，p>0．05。（4）心肌细胞MDA含量的变化：H2O2组心肌细胞匀浆中MDA含量较空白对照组有所增加（32．69±15．16 vs 9．79±3．52，p<0．05）；脂联素+H2O2组MDA的释放量较H2O2组下降（12．75±3．93 vs 32．69±15．16，p<0．05）；而脂联素+AraA+H2O2组与脂联素+H2O2组相比MDA的含量有所增加（28．67±4．94 vs 12．75±3．93，p<0．05），与H2O2组比较下降，差异有统计学意义，p<0．05；AraA+H2O2组与H2O2组比较差异无统计学意义，p>0．05。（5）心肌细胞SOD活性的变化：H2O2组心肌细胞匀浆中SOD活性较空白对照组有所下降（13．08±3．08 vs 24．09±4．58，p<0．05）；脂联素+H2O2组SOD的含量较H2O2组升高（19．99±3．12 vs 13．08±3．08，p<0．05）；而脂联素+AraA+H2O2组与脂联素+H2O2组相比SOD的含量有所下降（14．87±2．34 vs 19．99±3．12，p<0．05），与H2O2组比较升高，差异有统计学意义，p<0．05；AraA+H2O2组与H2O2组比较差异无统计学意义，p>0．05。（6）琼脂糖凝胶电泳DNA结果分析：空白对照组未显示出DNAladder，而H2O2组、AraA+H2O2组均有明显的DNA ladder形成，脂联素+H2O2组可以明显地减弱DNA ladder的形成，脂联素+AraA+H2O2组ladder的条带亮度介于两者之间。（7）各组心肌细胞凋亡率的比较：正常对照组细胞集中在B3区，在B4区和B2区内几乎无分布，凋亡率为1．2±2．08；H2O2组出现大量凋亡细胞，并有部分坏死细胞，其凋亡率为29．1±4．78，较空白对照组显著升高，p<0．05；AraA+H2O2组与H2O2组无明显差别，凋亡率为27．5±3．65，p>0．05；脂联素+H2O2组可显著减少B4区和B2区的细胞分布，即减少细胞凋亡和坏死，其凋亡率显著降低为9．0±3．30，与H2O2组相比差别有统计学意义，p<0．05；脂联素+AraA+H2O2组与脂联素+H2O2组相比凋亡率明显升高，为22．2±2．99，p<0．05，但低于H2O2组，p<0．05。结论：（1）H2O2可以诱导心肌细胞的损伤及凋亡；（2）脂联素可以逆转H2O2所致的心肌细胞损伤及凋亡作用，对心肌细胞有保护作用；（3）AMPK通道抑制剂AraA可以部分阻断脂联素的保护作用，即AMPK通道为脂联素发挥保护作用的途径之一。
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- [6].氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究[J]. 诊断学理论与实践 2013(05)
- [7].心肌细胞的纯化[J]. 中国病理生理杂志 2010(10)
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- [9].心肌细胞可以再生[J]. 科技导报 2009(08)
- [10].人类心肌细胞的更新[J]. 基础医学与临床 2009(07)
- [11].高糖对心肌细胞的直接伤害作用[J]. 实用糖尿病杂志 2009(05)
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- [16].三种不同乳鼠原代心肌细胞消化分离方法的对比研究[J]. 四川大学学报(医学版) 2017(02)
- [17].稳定微管对心肌细胞的影响[J]. 新医学 2016(08)
- [18].风湿性心脏病二尖瓣狭窄心房颤动与窦性心律心肌细胞起搏电流密度的差异[J]. 广东医学 2012(05)
- [19].骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展[J]. 华西医学 2009(01)
- [20].心肌细胞对脂肪酸的摄取与代谢[J]. 科学咨询(决策管理) 2009(04)
- [21].新生大鼠心肌细胞的原代培养[J]. 心血管康复医学杂志 2009(02)
- [22].荷兰培育心肌细胞取得进展[J]. 中华中医药学刊 2008(06)
- [23].中药调控自噬与缺血性心脏病关系的研究进展[J]. 中国中药杂志 2020(16)
- [24].神经调节蛋白1对高糖损伤的心肌细胞的保护作用及其机制[J]. 中国循环杂志 2016(09)
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- [26].心肌细胞培养进展[J]. 现代养生 2019(16)
- [27].心肌细胞再生基础研究与中医药探索[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2020(20)
- [28].哺乳动物心肌通过预存在的心肌细胞进行更新[J]. 生理科学进展 2013(02)
- [29].蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用研究[J]. 饲料工业 2020(01)
- [30].盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其机制的初步研究[J]. 畜牧兽医学报 2017(04)