非小细胞肺癌组织HER2和P300基因表达及其突变分析

论文摘要

目的:从mRNA和蛋白水平检测HER2和P300基因在非小细胞肺癌（no-small cell lungcancer,NSCLC）中表达状况,分析与临床病理参数的关系;检测NSCLC中HER2和P300基因频发突变位点突变情况,为了解NSCLC发生机制和研究分子靶向治疗奠定基础。方法:（1）运用免疫组化的方法检测HER2和P300蛋白在NSCLC中表达水平,研究其表达和临床病理参数的关系;（2）用RT-PCR法检测NSCLC中HER2和P300 mRNA表达水平,分析其和临床病理参数关系;（3）用PCR扩增HER2和P300基因组频发突变位点,用SSCP-银染法筛选出可疑突变样本,对其进行基因测序。结果:1)50例NSCLCs肿瘤组织中,36例HER2基因mRNA检测阳性,其中15例高表达（30%）;相应正常组织26例阳性,全部低表达。HER2 mRNA高表达与临床TNM分期、淋巴结转移否有关,TNMⅢ+Ⅳ期组HER2 mRNA高表达率为54.5%,高于TNMⅠ+Ⅱ期高表达率10.7%（P=0.035）;淋巴结转移组HER2 mRNA高表达率（40.6%）高于无淋巴结转移组（11.1%,P=0.029）。在50例肿瘤组织中,39例P300mRNA检测阳性,其中有21例高表达（42%）;相应正常对照组织有30例阳性,未见高表达,P300mRNA高表达各临床病理参数均未见相关。spearman相关性分析显示,HER2基因和P300基因mRNA表达之间没有统计学相关性。2)71例NSCLCs中HER2和P300蛋白高表达率分别为34%和54.9%,正常肺组织未见高表达。HER2在肺腺癌组织中45.5%高表达明显高于肺鳞癌率19.0%（P=0.039）;淋巴结转移组高表达率为43.2%,显著高于无淋巴结转移组18.5%（P=0.033）;TNMⅢ+Ⅳ期组高为表达率53.3%高于TNMⅠ+Ⅱ期组19.5%（P=0.003）。71例NSCLCs中39例有P300蛋白高表达,其高表达率为54.9%;P300高表达与临床病理参数均未见相关。NSCLCs中HER2和P300蛋白高表达之间未见相关性。对HER2和P300基因蛋白和mRNA表达进行比较,发现90%（45/50）标本在HER2蛋白和mRNA表达水平相一致,86%（43/50）在P300蛋白和mRNA表达水平相一致。3)针对P300和HER2两基因频发突变位点的4条目的片段在50例NSCLCs中均扩增成功;用SSCP-银染法,筛选出两个可疑突变样本,测序结果证实两样本突变均为HER2外显子20框内插入突变,为HER2基因2327-2329处插入三个碱基TCT,导致776甘氨酸缺失,同时缬氨酸和半胱氨酸插入（G776 del VC ins）。50例NSCLCs中,针对P300基因组的两个外显子检测未发现突变存在。结论:1、NSCLCs中存在HER2和P300基因mRNA和蛋白高表达。HER2基因高表达与临床分期、淋巴结转移与否有关,可以作为肺癌的一个不良预后分子标记;P300基因高表达和各临床病理参数未见相关;P300和HER2 mRNA以及蛋白高表达之间未见相关性。2、P300和HER2基因在蛋白和转录水平都具有很高的一致性,其蛋白表达和基因转录密切相关。3、NSCLCs中存在HER2外显子20突变,HER2基因突变为部分NSCLCs患者提供一个分子靶向治疗靶点。4、P300基因突变在NSCLC中并不常见;PCR-SSCP是筛选基因突变的有效方法。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 1 前言
• 2 第一部分
• 2.1 临床资料
• 2.2 实验材料方法
• 2.3 结果
• 3 第二部分
• 3.1 实验材料和方法
• 3.2 试验结果
• 4 第三部分
• 4.1 材料和方法
• 4.2 实验步骤
• 4.3 试验结果
• 5 讨论
• 5.1 3P00和HER2在肺癌中mRNA和蛋白表达及其相互关系
• 5.2 HER2和P300在NSCLC中部分位点突变分析
• 5.3 问题与展望
• 6 结论
• 参考文献
• 附录
• 缩略语
• 在学期间发表论文清单
• 致谢