坎地沙坦西酯片人体药动学和生物等效性及坎地沙坦吸收机制的研究

论文摘要

坎地沙坦（Candesartan,CDS）是一种新型的作用于肾素.醛固酮系统的抗高血压药物,它对血管紧张素Ⅱ1型受体有强亲和力,可选择性地阻断该受体的作用,从而阻断血管紧张素Ⅱ的血管收缩作用,减少醛固酮分泌,达到降压效果。由于CDS口服吸收差,临床应用多为其前体药物——坎地沙坦西酯（Candesartan Cilexetil,CC）,CC在胃肠道吸收过程中迅速完全转化为CDS。CC用于治疗原发性高血压、心力衰竭、高血压合并左心室肥厚、糖尿病肾病等多种疾病,疗效肯定。本课题建立了人血清中CDS的高效液相.荧光检测（HPLC-Flu）方法,用该方法考察了中国健康男性志愿者口服8 mg CC片后的药动学参数,并对两种制剂的生物等效性进行了评价;另外还应用Caco-2细胞模型和大鼠在体肠吸收模型对CDS的吸收机制进行了初步研究。课题的第一部分建立和验证了HPLC-Flu测定人血清中CDS浓度的方法。以萘普生为内标（I.S）,血清用液.液萃取进行处理。色谱柱:YMC?ODS柱（250mm×4.6mm,5μn）;柱温:30℃;流动相:10mmol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH为3.0）:乙腈=60:40（V/V）;流速:1.0mL/min;荧光检测波长:激发波长270nm,发射波长390nm;进样量:20μL。血清内源性杂质对样品的测定没有干扰。CDS与I.S的色谱保留时间分别为10.4min和16.5min。CDS在1.01～202ng·mL-1范围内线性良好（r=0.9998）,最低定量浓度为1.01ng·mL-1。CDS的日内、日间精密度和准确度良好,样品长期冻融（45天）和多次冻融（n=3）稳定性良好。该方法快速、灵敏、准确,可用于临床药动学及生物等效性研究。课题的第二部分考察了中国健康男性志愿者口服8 mg CC片后的药动学参数,并对两种制剂的生物等效性进行了评价。20名受试者随机编号分为两组,交叉口服给药进行试验,血样测定采用第一部分建立的HPLC-Flu法。结果显示,20名健康男性志愿者单剂量口服CC试验片和参比片8mg后药动学参数分别为:AUC0-t(ng·hr·mL-1):943.94±382.60和923.67±350.39:AUC0-∞(ng·hr·mL-1):979.72±380.41和967.95±353.61;Cmax(ng·mL-1):90.36±40.45和91.52±39.69;Tmax（h）:3.98±1.26和4.13±0.60;t1/2（h）:10.18±1.26和10.43±2.58。统计结果显示:Tmax经非参数统计（Wilcoxon检验）,试验制剂与参比制剂之间无显著性差异;试验片和参比片的AUC0～t,AUC0-∞o和Cmax经多因素方差分析（ANOVA）无显著性差异。由双单侧t检验计算90%置信区间,试验片AUC0-t的90%置信区间落在对照参比制剂的90.28%～113.90%范围内,AUC0-∞的90%置信区间落在对照参比制剂的89.99%～112.25%范围内,Cmax的90%置信区间落在对照参比制剂的86.03%～111.07%范围内,试验制剂与参比制剂生物等效。本实验得到的中国志愿者的药动学参数与文献报道的欧洲志愿者的参数基本吻合。CDS个体间药动学差异较大。课题的第三部分考察了CDS在Caco-2细胞模型中的摄取及转运机制。研究结果表明,CDS在Caco-2细胞中的摄取主要为被动扩散的方式;在pH6.0-8.0的介质环境中,药物的摄取和转运无pH依赖性;不同浓度CDS的吸收表观通透系数Papp平均值为(2.18×10-6)cm·sec-1;加入P-糖蛋白（P-glycoprotein）抑制剂环孢素A和维拉帕米能显著地提高CDS的吸收,同时降低CDS的分泌,表明CDS的吸收过程可能受到P-gp的外排作用。课题的第四部分考察了CDS在大鼠在体肠吸收模型中的吸收情况。结果显示,CDS在大鼠不同肠断（十二指肠、空肠、回肠）的吸收速率常数（Ka）和有效透皮系数(Peff)无显著性差异,说明CDS无特殊的吸收窗;浓度范围0.2～25μg·mL-1的CDS在空肠段吸收的Ka和Peff无显著差异,说明CDS的吸收机制为被动扩散;一些治疗心血管疾病药物联合给药不影响CDS在大鼠空肠的吸收。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 坎地沙坦体内分析方法的建立与验证
• 1.1 引言
• 1.2 实验仪器、药品和试剂
• 1.2.1 仪器
• 1.2.2 药品和试剂
• 1.2.3 溶液的配制
• 1.2.4 标准曲线和质控样品的配制
• 1.3 方法
• 1.3.1 血清样品预处理
• 1.3.2 色谱条件
• 1.4 结果
• 1.4.1 色谱行为
• 1.4.2 标准曲线
• 1.4.3 最低定量浓度
• 1.4.4 精密度
• 1.4.5 准确度
• 1.4.6 稳定性
• 1.5 讨论
• 1.5.1 样品HPLC分析条件优化
• 1.5.2 样品预处理优化
• 第二部分 坎地沙坦西酯片人体药动学及生物等效性研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 药品
• 2.2.2 受试者
• 2.2.3 给药方案
• 2.2.4 血样采集
• 2.2.5 血样分析方法
• 2.2.6 药动学参数计算方法
• 2.2.7 统计分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 血药浓度
• 2.3.2 药动学参数
• 2.3.3 统计分析
• 2.4 生物等效性评价
• 2.5 讨论
• 第三部分 坎地沙坦在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验仪器与材料
• 3.2.1 细胞
• 3.2.2 实验仪器
• 3.2.3 药品与试剂
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 CDS溶液配制
• 3.3.2 CDS的高效液相-荧光检测方法
• 3.3.3 Caco-2细胞模型的建立
• 3.3.4 CDS在Caco-2细胞模型中的摄取实验
• 3.3.5 CDS在Caco-2细胞模型中的转运实验
• 3.3.6 数据计算
• 3.4 实验结果
• 3.4.1 CDS的高效液相-荧光检测方法
• 3.4.2 CDS的细胞摄取实验结果
• 3.4.3 CDS的细胞转运实验结果
• 3.5 讨论
• 第四部分 坎地沙坦的大鼠在体肠吸收研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验仪器与材料
• 4.2.1 实验动物
• 4.2.2 实验仪器
• 4.2.3 药品与试剂
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 CDS的高效液相-荧光检测方法
• 4.3.2 大鼠在体肠单向灌流法
• 4.4 实验结果
• 4.4.1 CDS在大鼠不同肠断的吸收情况
• 4.4.2 不同浓度CDS在大鼠小肠中的吸收情况
• 4.4.3 CDS与4种药物合并给药的吸收情况
• 4.5 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附录Ⅰ 口服药物肠吸收实验方法及研究进展（综述）
• 附录Ⅱ 在校期间发表论文情况
• 致谢