Ghrelin对胃窦平滑肌的收缩、[Ca2+]i和IK（Ca）通道开放的影响及与NO关系研究

论文摘要

目的：探讨ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌条收缩活动的影响,以及对平滑肌细胞内钙离子浓度和钙依赖性钾通道开放的效应及其与NO关系研究。方法：采用荧光免疫组化方法观察胃窦平滑肌细胞ghrelin受体（GHS-R）的表达；采用电场刺激胃窦部肌间神经丛,探讨ghrelin等对胃窦平滑肌收缩活动的影响；利用钙离子指示剂Fluo-3/AM作为荧光探针,应用激光共聚焦显微镜技术,研究ghrelin对胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的影响；采用急性分离豚鼠胃窦平滑肌细胞和膜片钳技术,探讨ghrelin对胃窦平滑肌细胞钙依赖性钾通道（IK（Ca））开放的影响；并观察各组研究与NO关系。结果：（1）免疫荧光组化研究发现,在豚鼠胃窦平滑肌细胞有GHS-R免疫反应阳性物的表达；（2）电场刺激胃窦平滑肌间神经丛,ghrelin可显著增强电场刺激对胃窦平滑肌条的收缩效应（P<0.05～0.01）,该作用可被河豚毒（TTX）、阿托品阻断；氧化氮供体硝普钠（SNP）可显著减弱ghrelin对平滑肌条的收缩效应（P<0.01）,而一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可显著增强该收缩效应（P<0.05）; （3） Ghrelin可明显增加平滑肌细胞内Ca2+浓度,且呈明显的量效依赖关系（P<0.05～0.01）,该作用可被ghrelin受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6完全阻断；SNP可减弱ghrelin诱导的胞内Ca2+荧光强度升高（P<0.01）; L-NAME则可显著增强ghrelin促胞内Ca2+浓度增加作用（P<0.01）；（4）全细胞膜片钳研究显示,胃窦平滑肌细胞膜存在钙依赖性钾通道,ghrelin可显著抑制该通道的钾外向电流（P<0.01）, SNP可使ghrelin对平滑肌细胞钙依赖性钾电流的抑制作用显著减弱（P<0.01）,而L-NANE可使ghrelin该抑制作用增强（P<0.01）。结论：豚鼠胃窦平滑肌细胞有GHS-R的表达；Ghrelin可显著增强电场刺激诱导的胃窦平滑肌收缩效应；ghrelin可通过其特异性受体增加平滑肌胞内Ca2+浓度,并通过抑制细胞膜钙依赖性钾通道的开放调控细胞兴奋性；ghrelin上述作用可能与NO通路有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分
• 第1章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法及观察项目
• 1.3 统计学分析
• 第2章 结果
• 2.1 电场刺激肌间神经对胃窦平滑肌条收缩活动的影响及机制
• 2.2 Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌收缩效应的影响
• 2.3 NO对电场刺激下Ghrelin诱导的胃平滑肌收缩反应的影响
• 第3章 讨论
• 第二部分
• 第1章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法及项目
• 1.3 统计学分析
• 第2章 结果
• 2.1 Ghrelin受体在胃窦平滑肌细胞的表达
• 2+浓度的影响'>2.2 Ghrelin对胃窦平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的影响
• 2+浓度的影响'>2.3 NO对Ghrelin诱导的胃窦平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的影响
• 第3章 讨论
• 第三部分
• 第1章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法及项目
• 1.3 统计学分析
• 第2章 结果
• 2.1 正常胃窦平滑肌细胞钙依赖性钾电流
• 3-GHRP-6、SNP和L-NAME对胃窦平滑肌细胞钙依赖性钾电流的影响'>2.2 Ghrelin、D-Lys³-GHRP-6、SNP和L-NAME对胃窦平滑肌细胞钙依赖性钾电流的影响
• 2.3 SNP对Ghrelin诱导的平滑肌细胞钙依赖性钾电流的影响
• 2.4 L-NAME对Ghrelin诱导的平滑肌细胞钙依赖性钾电流的影响
• 第3章 讨论
• 结论
• 1. Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌收缩活动影响及与NO关系研究
• 2. Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌细胞钙离子浓度影响及与NO关系研究
• 3. Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌钙依赖性钾通道开放的影响与NO关系研究
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间研究成果
• 致谢