论文摘要
血管生成是实体瘤生长和转移的必备条件,肿瘤组织为使自身能够无限制地侵袭性生长,则必须依赖持续广泛的新生血管形成。肿瘤的血管生成是有关的刺激、抑制因子共同调节的结果,血管内皮细胞生长因子（VEGF, vascular endothelial growth factor）是其中作用强、特异性最高的促血管生成因子,近年来针对VEGF展开的抗血管生成治疗已取得巨大的成果。树突状细胞（DC, dendritic cell）是体内功能最强大的专职抗原递呈细胞,具有强大的激活静息T细胞、激发免疫应答的功能,是机体免疫应答的始动者,在机体抗肿瘤免疫作用中处于核心地位。近年来研究发现,绝大多数实体瘤能分泌VEGF,它一方面促进肿瘤的血管生成,另一方面显著抑制造血祖细胞分化成熟为DC,抑制机体的抗肿瘤免疫应答,从而使肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视,促使肿瘤生长。我们前期的体外研究显示,半枝莲提取物通过抑制VEGF的表达而达到抑制血管生成的作用。在此基础上,本实验提取半枝莲中有效成分,鉴定其性质,并根据药典规定对其进行质量控制;然后建立S180移植瘤小鼠模型,观察半枝莲提取物在体内的抑瘤效果及作用靶点,应用免疫组化技术研究半枝莲提取物对S180移植瘤小鼠瘤体内VEGF表达及DC浸润的影响,探讨半枝莲提取物的药用机制。实验结果如下:1、半枝莲的提取、定性与含量测定:利用高浓度乙醇浸渍提取半枝莲中有效成分,然后用石油醚处理,除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。根据显色反应（盐酸锌粉试验和三氯化铝溶液试验）对半枝莲提取物进行定性,结果显示其中主要含有黄酮类化合物。最后根据中国药典2005版将总黄酮的含量以野黄芩苷计算来控制其质量,用紫外分光光度法在335nm处测定半枝莲提取物中总黄酮的平均含量为23.842%。2、半枝莲提取物对S180移植瘤小鼠的影响:半枝莲提取物高剂量组、半枝莲注射液组肿瘤生长抑制率均高于40%,且抑制率与模型对照组比较有统计学差异（P<0.05）,其中半枝莲提取物高剂量组与对照组比较有显著性差异（P<0.01）。半枝莲提取物中、低剂量组虽无统计学意义,但高、中、低剂量组的抑瘤率呈典型的线性关系,提示半枝莲提取物剂量依赖性地抑制肿瘤的生长。各药物组的脾指数无统计学意义,但半枝莲提取物高、中、低剂量组脾指数亦呈线性关系,与抑瘤率相对应,我们推测半枝莲提取物有提升机体免疫力的作用,但由于半枝莲提取物的剂量不足抑或纯度不高,使得无统计学意义。3、半枝莲提取物对S180移植瘤小鼠瘤体中VEGF及DC的影响:随着半枝莲提取物剂量的增加,VEGF在小鼠S180肉瘤组织内表达逐渐减弱,半枝莲提取物中剂量组具有统计学意义（P < 0.05）,半枝莲提取物高剂量组具有显著的统计学意义（P < 0.01）;并且上述两个剂量组对小鼠S180肉瘤组织内VEGF表达的抑制程度较阳性药物内皮抑素组和人参皂甙Rg3组更为强大。模型对照组未见有S100阳性树突状细胞的浸润,而各实验组则见不同程度的浸润,其中以半枝莲提取物中、高剂量组的浸润密度最为突出,具有显著的统计学意义（P < 0.01）。并且各用药组VEGF表达的评分越低,树突状细胞的浸润密度则相对越高,故而我们将各组的VEGF表达与树突状细胞浸润密度进行相关性分析,结果显示:VEGF表达与DC浸润密度之间呈显著性负相关（r = -0.937,P = 0.002）。结论:半枝莲提取物剂量依赖性地抑制肿瘤的生长,同时在一定程度上提高了机体的免疫力,其机理可能是抑制肿瘤组织VEGF的表达,抑制其介导的肿瘤血管生成;同时减轻VEGF对DC分化成熟的抑制,进而增强机体的抗肿瘤免疫,从而达到良好的抑瘤效果。