论文摘要
乙型病毒性肝炎（hepatitis B, HB）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的世界范围内流行的一种严重危害人类健康的疾病。HBV感染后,有相当部分的患者最终将转化为慢性肝病,并发肝硬化和原发性肝癌。以往用于HBV研究的实验模型多为HepG2细胞,HCC组织及转基因动物等模型,这些模型中HBV DNA均已稳定的整合入肝细胞的基因组,是一种与宿主细胞静态相容的结果,不能反映病毒感染过程中细胞中动态变化过程,以作为观察研究病毒抗原与宿主互作的研究模型。为此我们选用四环素调控的慢病毒系统来实现乙肝病毒基因的可调控表达,通过人为的控制可观察不同时期细胞内的整体变化情况。研究中,我们构建了含有乙肝病毒基因（X, P, C, preC-C, S, preS2-S, PreS1-S2-S）的七种可诱导表达载体质粒,经鉴定DNA序列正确。利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控质粒pLVX-Tet-On和表达质粒pLVX-GOI的病毒颗粒,滴度达到可108LPs/ml。将这两种病毒共感染HepG2和L02细胞株,并利用双重抗生素筛选（G418和Puromycin）获得整合有目的基因的稳定细胞株。随后,对于构建的细胞株中目的基因的存在进行了鉴定,并对其中含有X和PreS1-S2-S的细胞株HepG2-X/LS诱导表达的RNA进行鉴定,证明获得可诱导表达的mRNA,进一步对X转基因细胞HepG2-X进行诱导产物X蛋白鉴定,证明获得了X蛋白可诱导表达的细胞株。HBV基因可调控细胞模型的构建,为进一步研究HBV各基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了理想的实验模型。
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