论文摘要
本论文对动物性食品中兽药恩诺沙星残留的免疫学检测方法进行了深入系统的研究。研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备出高效价和高特异性的恩诺沙星抗体。建立了简便、快捷、实用的恩诺沙星免疫学检测方法——直接竞争酶联免疫检测方法和化学发光检测法。分别对所建立方法的性能指标进行了系统评价,考察了方法检测限、定量限、精密度、准确度。两种方法检测灵敏度较高,直接竞争酶联免疫检测方法灵敏度(IC50)为0.35±0.05μg/kg,检测限(IC15)为0.02±0.01μg/kg,对牛奶、鸡肉、猪肉、虾、鱼肉和牛肉等动物源性食品中的恩诺沙星残留进行检测,几种样品经过乙腈:0.1M氢氧化钠按体积比为4:1的混合溶液提取进行稀释即可消除基质影响,回收率可达到76%-109%。化学发光检测法IC50为0.07±0.015μg/kg,IC15为0.008±0.002μg/kg,牛奶经丙酮沉淀蛋白后进行稀释即可消除基质影响,其他样品处理方法和直接竞争酶联免疫检测方法相同,回收率为63%-89%,其整个检测时间比传统的颜色反应节省约20%。通过高效液相色谱检测方法,对建立的恩诺沙星直接竞争酶联免疫检测方法和化学发光检测法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值在0.95以上。直接竞争酶联免疫检测方法和快速提取食品中兽药残留的方法组合为恩诺沙星快速检测技术体系,为进一步开发并研制检测恩诺沙星残留试剂盒奠定了基础。
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