论文题目: 脂联素在原核系统中的表达及其抑瘤活性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 影像医学与核医学
作者: 王胜芬
导师: 韩佩珍
关键词: 球型结构域,重组蛋白,亲和层析,细胞增殖,血管形成
文献来源: 中国协和医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 肥胖是全球的公共健康问题，肥胖与多种血管形成有关的疾病相关联，如糖尿病、心血管疾病和癌症。脂肪组织不仅用于贮存能量而且具有重要的内分泌功能，脂肪组织分泌多种活性多肽统称为脂肪细胞因子。脂联素（ACRP30，ADIPOQ，apM1基因转录产物）是近期发现的由脂肪细胞分泌的蛋白，具有抗糖尿病、抗动脉粥样硬化作用。在有胰岛素抵抗和高胰岛素血症如向心性肥胖和2型糖尿病情况下，循环中脂联素水平下降。 近期有研究发现低脂联素水平可增加多种癌症发生的危险性。有体外实验研究表明，脂联素抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，通过鸡绒毛膜尿囊膜和小鼠角膜血管形成的体内实验发现，脂联素显著抑制新生血管的形成，因此，研究认为脂联素是血管形成的负调节因子。另有研究发现，脂联素刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞分化成毛细管状结构，在体内刺激新生血管形成，因此，研究认为脂联素是血管形成的正调节因子。 由于目前关于脂联素对血管形成和肿瘤形成的影响还缺乏足够的证据，我们从事该研究的目的是为进一步提供这方面的研究资料，本研究主要解决以下两方面的问题：1．克隆和表达全长ACRP30蛋白及ACRP30球型结构域蛋白，以得到纯化的重组蛋白；2．重组ACRP30对细胞增殖和血管形成的影响。 本研究采用的方法：用TRIzol试剂从小鼠脂肪组织中提取总RNA，用小鼠ACRP30序列特异性引物经RT-PCR扩增出全长ACRP30 cDNA序列，将目的序列插入pGEM-T载体，目的序列经DNA测序证实。实验采用原核系统表达目的蛋白，用含BamH Ⅰ的5’CTATATGGATCCGAAGATGACGTTAC 3’作为上游引物，用含HindⅢ的5’GTAGTGAAGCTTTCAGTTGGTATCATG 3’作为下游引物，扩增出去除信号肽的693bp的小鼠ACRP30 cDNA序列（18-247氨基酸），目的片段经BamH Ⅰ／HindⅢ双酶切后亚克隆至pET-32（a）表达载体，重组质粒命名为pET-ACRP30，编码带有Trx.tag 和His6 tag的全长ACRP30融合蛋白。采用5’TATATGGATCCGCCGCTTATGTGT 3’作为上游引物，用同样的方法构建重组表达质粒pET-gACRP30，编码含有Trx.tag和His6tag的ACRP30球型结构域融合蛋白
论文目录:
英文缩略词
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料与方法
实验材料
菌株及细胞株
质粒
引物
工具酶
DNA及蛋白质分子量标准
主要试剂
主要溶液
主要培养基
细胞培养耗材
鸡胚
主要仪器
实验方法
基因克隆部分
去信号肽ACRP30基因及球型结构域ACRP30基因获得入亚克隆
蛋白表达及纯化方法
体外、体内实验方法
统计分析
实验结果
讨论
结论
参考文献
附录
综述
致谢
发布时间: 2006-10-13
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