血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠肠道免疫屏障的影响

论文摘要

目的:观察中药血必净注射液对肠缺血再灌注损伤大鼠细胞因子、肠道病理形态学、肠道免疫细胞中P53基因表达的影响,探讨肠缺血再灌注损伤后中药多靶点保护肠道免疫屏障的作用机制。方法:（1）造模研究:将Wistar大鼠随机分为4组:①对照组（NOR）;②模型组1（MG1）;③模型组2（MG2）;④模型组3（MG3）。分别夹闭肠系膜上动脉30分钟、45分钟、60分钟,对模型进行血清内毒素和多项生化指标检测,观察重要脏器病理形态学改变和大鼠72小时死亡率,筛选理想的夹闭时间。（2）将Wistar大鼠随机分为4组:①正常对照组（NOR）;②模型对照组（CON）;③抗生素组（ANT）;④血必净注射液组（XBJ）。选择最佳造模方法制备小肠缺血再灌注大鼠模型,采用ELISA方法,分别观察造模后24、48和72小时血清细胞因子（TNF-a,IL-1和IL-6）水平的改变;采用HE染色法,分别观察造模后24、48和72小时小肠病理形态学改变,测定肠粘膜厚度、肠绒毛高度和肠粘膜损伤指数。（3）将Wistar大鼠随机分为2组:①模型对照组（CON）;②血必净注射液组（XBJ）。选择最佳造模方法制备小肠缺血再灌注大鼠模型,采用免疫组化双染色法分别观察造模后24、48和72小时大鼠小肠粘膜固有层内CD4+、CD3+、CD8+T淋巴细胞及IgA浆细胞中P53基因表达的情况,比较血必净注射液组与对照组P53基因表达的差异。结果:（1）与对照组比较,模型组2和模型组3大鼠血清内毒素水平和UREA、CREA、ALT等有关生化指标明显升高（P<0.01）,重要脏器出现明显病理损害,符合MODS模型标准。三组（MG1、MG2和MG3）大鼠72小时死亡率分别为10%、20%、70%。综合指标表明夹闭45分钟效果最为理想。（2）模型对照组造模后血清TNF-a、IL-1和IL-6水平均显著高于正常对照组（P<0.01）。抗生素组较模型对照组而言,血清TNF-a水平在造模后72小时显著降低（P<0.01）;血清IL-1水平在造模后48、72小时显著下降（P<0.01）;血清IL-6水平在造模后24、48、72小时显著下降（P<0.01）。血必净注射液组造模后24、48、72小时血清TNF-a、IL-1和IL-6水平较模型对照组、抗生素组显著下降（P<0.01）。模型对照组肠粘膜厚度、肠绒毛高度均较正常对照组显著降低,肠粘膜损伤评分升高（P<0.01）;血必净注射液组和抗生素组较模型对照组肠粘膜厚度、肠绒毛高度显著升高,肠粘膜损伤评分降低（P<0.01）;血必净注射液组和抗生素组相比较,肠粘膜厚度、肠绒毛高度显著升高,肠粘膜损伤评分降低（P<0.01）。（3）造模后48、72小时CD4+、CD3+T淋巴细胞及IgA浆细胞中P53基因表达对照组高于血必净注射液组（P<0.05,P<0.01）;CD8+T淋巴细胞中P53基因表达造模后24、48、72小时两组均无差异性（P>0.05）。对照组CD4+T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比24、48小时高（P<0.01）;CD3+T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比24小时高（P<0.01）;IgA浆细胞中P53基因表达造模后72小时比24、48小时高（P<0.05）。血必净注射液组CD3+T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比24小时低（P<0.05）。结论:模型组2在致伤因素、器官功能、病理形态和死亡率等方面均符合MODS模型的标准,是较理想的模拟临床肠缺血再灌注损伤诱发MODS的模型。血必净注射液能有效地降低小肠缺血再灌注大鼠血清TNF-a、IL-1和IL-6水平;可以显著减轻小肠缺血再灌注所致肠粘膜损伤;能够通过对肠壁免疫细胞中凋亡基因P53表达的调控,实现对肠道免疫屏障的保护作用。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 实验研究
• 技术路线图
• 实验一 大鼠小肠缺血再灌注损伤诱发多器官功能障碍综合征的造模研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 2 实验方法
• 2.1 模型制作
• 2.2 动物分组
• 2.3 动物处理及标本采集
• 2.4 观察指标及检测方法
• 3 结果
• 3.1 一般情况观察和死亡率
• 3.2 血浆内毒素水平
• 3.3 生化指标
• 3.4 病理形态学变化
• 实验二 血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠血清细胞因子的影响
• 1. 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品
• 1.3 实验试剂
• 2 实验方法
• 2.1 动物模型制备
• 2.2 动物分组
• 2.3 给药方法
• 2.4 动物处理及标本采集
• 2.5 观测指标及检测方法
• 2.6 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 血清TNF-A 水平
• 3.2 血清IL-1 水平
• 3.3 血清IL-6 水平
• 实验三 血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠肠道组织形态学的影响
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品
• 2 实验方法
• 2.1 动物模型制备
• 2.2 动物分组
• 2.3 给药方法
• 2.4 动物处理及标本采集
• 2.5 观测指标及检测方法
• 2.6 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 光镜下各组小肠病理形态学变化
• 3.2 各组肠粘膜厚度、肠绒毛高度测定和CHIU 肠粘膜损伤评分结果
• 实验四 血必净注射液对大鼠肠缺血再灌注肠壁免疫细胞中P53 基因表达的影响
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品
• 1.3 实验试剂
• 1.4 实验仪器设备
• 2 实验方法
• 2.1 动物模型制备
• 2.2 动物分组
• 2.3 给药方法
• 2.4 动物处理及标本采集
• 2.5 石蜡切片的制作过程
• 2.6 免疫组化双染试验步骤
• 2.7 观测指标及检测方法
• 2.8 统计学方法
• 3 结果
• + T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较'>3.1 两组肠壁CD4⁺ T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较
• + T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较'>3.2 两组肠壁CD3⁺ T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较
• + T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较'>3.3 两组肠壁CD8⁺ T 淋巴细胞中P53 基因表达相比较
• 3.4 两组肠壁IGA 浆细胞中P53 基因表达相比较
• +、CD8⁺ T 淋巴细胞及IGA 浆细胞中P53 基因表达相比较'>3.5 对照组肠壁CD3⁺、CD8⁺ T 淋巴细胞及IGA 浆细胞中P53 基因表达相比较
• +、CD4⁺、CD8⁺ T 淋巴细胞及IGA 浆细胞中P53 基因表达相比较'>3.6 血必净注射液组肠壁CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ T 淋巴细胞及IGA 浆细胞中P53 基因表达相比较
• 讨论
• 1 实验模型的研究
• 1.1 肠缺血再灌注损伤与MODS
• 1.2 MODS 实验模型的标准
• 1.3 肠缺血再灌注损伤模型的分类
• 1.4 本实验模型的特点及优势
• 2 小肠缺血再灌注损伤中药干预作用的研究
• 2.1 中医学对肠缺血再灌注损伤致MODS 的认识及本研究的立法依据
• 2.2 血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠血清细胞因子的影响
• 2.3 血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠肠道组织形态学的影响
• 2.4 血必净注射液对大鼠肠缺血再灌注肠壁免疫细胞中P53 基因表达的影响
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢
• 查新报告